2011-06-29
org.kosen.entty.User@136bbc5a
오정민(rodem00)
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Hepatocarcinoma 에서 4-HNE를 HPLC-Mass로 측정하려고 하는데,
논문에 보니 클로로포름과 메탄올으로 지방 추출 후에 클로로포름 층을 측정하는데,
클로로포름을 메탄올에 다시 희석시켜서 HPLC-Mass로 측정하는 것 같은데, 구체적인
방법 및 희석 volume등이 나와 있지 않아서 문의드립니다.
세포에서 4-HNE를 측정해보신 분들의 고견을 부탁드립니다.
- 4-HNE
- Mass
- cell
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답변 2
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답변
최규석님의 답변
2011-06-30- 0
> Hepatocarcinoma 에서 4-HNE를 HPLC-Mass로 측정하려고 하는데, > > 논문에 보니 클로로포름과 메탄올으로 지방 추출 후에 클로로포름 층을 측정하는데, > > 클로로포름을 메탄올에 다시 희석시켜서 HPLC-Mass로 측정하는 것 같은데, 구체적인 > > 방법 및 희석 volume등이 나와 있지 않아서 문의드립니다. > > 세포에서 4-HNE를 측정해보신 분들의 고견을 부탁드립니다. 일반적으로 LC-MS의 경우는요 최대한 농도가 묽게해서 측정하셔야됩니다. 그리고 매스를 쓰실려면요 GC-MS가 아닌 LC-MS에서는 MeoH, ACN, H20을 사용합니다. 즉, 클로로포름으로 LC-MS을 하지 않기 때문입다. 그러므로 양은 일단 신경쓰지 마시고요. 전체 농도가 최대 1ppm짜리를 만들어서 LC-MS를 측정하세요. 만약 싱글 매스가 아닌경우 LC-MS/MS의 경우에는 매스가 손상될 수 있으니 50ppb 정도 농도가 되게만 만들면 됩니다. -
답변
이상후님의 답변
2011-06-30- 0
> Hepatocarcinoma 에서 4-HNE를 HPLC-Mass로 측정하려고 하는데, > > 논문에 보니 클로로포름과 메탄올으로 지방 추출 후에 클로로포름 층을 측정하는데, > > 클로로포름을 메탄올에 다시 희석시켜서 HPLC-Mass로 측정하는 것 같은데, 구체적인 > > 방법 및 희석 volume등이 나와 있지 않아서 문의드립니다. > > 세포에서 4-HNE를 측정해보신 분들의 고견을 부탁드립니다. CHCl3로 지방층을 추출한 후에 N2 gas나 evaporator로 dryness시킨 후에, 여기에 methanol:Hex = 9:1로 구성된 용매를 넣고 voltexing후에 0.2 um filter에 여과시킨후에 LC/MS에 주입해서 분석합니다. 물론 이때 정확한 정량을 위해 4-HNE-d3같은 내부표준물질을 추출후에 바로 넣어주고 같이 전처리 해주면 보정이 됩니다.