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안녕하세요.
HPLC Buffer 인 H3PO4 Buffer와 Ammonium formate Buffer에 대해 알고 싶습니다.
보통 HPLC에 ACN, MeOH와 함께 위 두 Buffer를 사용하는데 어떤 물질에서 두가지 Buffer 조건에
따라 분리능이 달라지는지가 궁금합니다.
그럼 늦은밤 편안하게 보내세요.
- HPLC
- H3PO4
- Ammonium formate
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
조윤환님의 답변
2011-07-06- 0
HPLC에서 buffer의 역할은 pH를 유지하는 것입니다. 이는 유기물질의 경우 pKa에 따라 이온화된 형태가 달라지고, 이로인해 retention의 정도가 달라지므로 분리도가 변화하기 때문입니다.
따라서 사실 pH가 같다면 큰 buffer의 종류에 따라 큰 차이는 없다고 생각하시면 좋겠습니다.
좀더 자세한 내용은 아래 링크를 참고하시면 좋을듯 합니다.(Fig. 3를 잘 보시길...)
http://www.labplus.co.kr/tech/tech_note.asp?not_no=135
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안녕하세요.
HPLC Buffer 인 H3PO4 Buffer와 Ammonium formate Buffer에 대해 알고 싶습니다.
보통 HPLC에 ACN, MeOH와 함께 위 두 Buffer를 사용하는데 어떤 물질에서 두가지 Buffer 조건에
따라 분리능이 달라지는지가 궁금합니다.
그럼 늦은밤 편안하게 보내세요.
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답변
이상후님의 답변
2011-07-11- 0
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안녕하세요.
HPLC Buffer 인 H3PO4 Buffer와 Ammonium formate Buffer에 대해 알고 싶습니다.
보통 HPLC에 ACN, MeOH와 함께 위 두 Buffer를 사용하는데 어떤 물질에서 두가지 Buffer 조건에
따라 분리능이 달라지는지가 궁금합니다.
그럼 늦은밤 편안하게 보내세요.
윗분의 답변처럼 pH 유지 목적도 있습니다. 다른 목적으로는, 분석하고자 하는 물질의 크로마토그램상에서 peak tailing을 감소시켜주기 때문에 사용하기도 합니다. H3PO4 buffer의 경우는 시료가 내산성 물질의 경우에 사용하거나 H3PO4에 녹아서 안정화 되는 물질 분리에 사용할 수 있겠습니다. 반면에 ammonium formate는 물에 녹아 formic acid와 ammonium ion을 형성하는데 두 물질의 산해리상수인 pKa값이 3.8과 9.2가 되어서 주로 acidic 물질이나 basic 물질 또는 양쪽성 물질의 분리시에 HPLC뿐만 아니라 HPLC/MS에서 많이 사용하는 buffer입니다.