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large culture 후에 IPTG 넣어주기 전에 15도에서 30분정도 놔두라고 하잖아요..
이 이유가 먼가요? IPTG를 바로 넣어주면 cell에 무리가 가서 induction을 안할 수도 있나요>?
- pcold
- induction
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
장성재님의 답변
2011-08-01- 2
pCold vector의 경우에는 대장균의 cold shock protein인 cspA 유전자의 프로모터를 사용하는 발현 벡터입니다. 따라서, 다른 벡터와는 달리 15도의 저온에서 induction을 하는 특징을 가지고 있습니다. 또한 pCold 벡터는 대장균에서 유래하는 promoter를 이용하고 있으므로, 거의 모든 대장균주를 발현용 숙주로 이용할 수 있다는 장점도 가지고 있습니다.
자세한 내용은 takara-bio 홈페이지를 참고하세요.
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large culture 후에 IPTG 넣어주기 전에 15도에서 30분정도 놔두라고 하잖아요..
이 이유가 먼가요? IPTG를 바로 넣어주면 cell에 무리가 가서 induction을 안할 수도 있나요>?
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답변
장성재님의 답변
2011-08-01- 2
첨부파일
직접 실험을 통하여 그 결과를 확인하셨다면 문제될 것이 없겠지요. 하지만, 37도에서 배양하던 것을 cold shock 조건에서 induction하신다면 당연히 배양액 내의 온도를 맞추기 위해서 15도로 먼저 조건을 맞추는 것이 당연할 것으로 보입니다.
발현하는 단백질에 따라서 pCold vector를 사용하실 때의 조건에는 차이가 있을 수 있기 때문에 직접 실험을 통하여 얻으신 결과 쪽 (조건 검토를 완료하셨다면)을 신뢰하시는 편이 좋을 것으로 보입니다.
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large culture 후에 IPTG 넣어주기 전에 15도에서 30분정도 놔두라고 하잖아요..
이 이유가 먼가요? IPTG를 바로 넣어주면 cell에 무리가 가서 induction을 안할 수도 있나요>?
그건 알겠는데요.. 제가 궁금한 건 induction 전에 cooling을 왜 해주어야 하는지 궁금한 건데요.. pCold 사용 protocol을 보면 30분정도 cooling을 해주라고 합니다. 그런데 제가 생각하기에는 굳이 cooling이 필요하지 않다고 생각이 되고요 제가 하나만 cooling하지않고 IPTG를 넣어 induction 하였을 때 cooling 한것과 비교해서 차이가 없었습니다. 하지만 혹여나 이것이 어떤 문제를 일으키지 않을까 해서 물어본 것입니다. 이거에 대해서 pCold information에서 나와 있지 않기 때문에 아시는분이 계신가해서 여쭌겁니다..