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안녕하세요.
제가 이번에 형광으로 Metal sensor 실험을 하려고 하는데,
H2O에서 실험을 해야 해서 버퍼 용액을 만들려고 합니다.
pH 7 에서 실험을 하려고 buffer를 Bis-tris를 사용하려고 합니다.
그런데 논문마다 0.5 M Bis-tris buffer 혹은 0.1 M, 심지어 1mM Bis-tris buffer 를
사용하던데 농도는 어느걸로 해도 상관이 없나요? 상관 없다면 될 수 있으면
낮은 몰농도의 버퍼용액을 사용하려구요.
참고로 제가 하는 실험은 Ligand 10uM 에 Metal을 200eq (2mM) 까지 넣어서
ligand의 형광이 증가하는지 살펴보는 실험입니다.
레시피는 아래 사이트 참고해서 만드는데
저는 Bis-tris 넣고 나서 HCl로 pH 조절하는데 여기는 HCl은 없더라구요.
http://www.biomol.net/en/tools/buffercalculator.htm
To make 500 ml of 0.01 M Bis-tris (pKa=6.46) Buffer: pH= 7
1) Dissolve 1.046 g of Bis-tris base (Mr = 209.2) in approx. 450 ml of pure water.
2) Add 4.426 g NaCl.
3) Titrate to pH 7 at the lab temperature of 25oC with monovalent strong base or acid as needed.
Make up volume to 500 ml with pure water
4) Buffer will, of course, be pH 7.00 at 25oC
NaCl을 선택해서 0.01M Bis-tris pH=7 을 만들려고 한다면,
위의 절차대로 해서 만들라고 하는데 저는 2번 단계를 생략하고 바로 3번으로 가서
Bis-tris에 바로 HCl을 소량 넣어서 pH를 조절해서 만들었는데 NaCl을 안 넣어도 되나요?
만약 NaCl을 꼭 넣어야 한다면 왜 넣어줘야 하나요?
두줄요약)
1. Bis-tris Buffer 용액 만들 때 농도를 저농도로 만들어도 되나요?
2. pH 조절을 HCl로 했는데, NaCl을 pH 조절 전에 꼭 넣어야 하나요?
- Buffer
- Bis-tris
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
조윤환님의 답변
2011-08-08- 0
두줄요약)
1. Bis-tris Buffer 용액 만들 때 농도를 저농도로 만들어도 되나요?
사용할 완충 용액의 농도는 실험할 시스템에 따라 달라지게 됩니다. 이는 완충용액의 농도에 따라 pH변화를 감당할 수 있는 힘, 즉 buffer capacity가 달라지기 때문입니다. 따라서 실험에서 발생할 것으로 예상되는 pH변화 정도를 가만해서 농도를 결정하시면 되겠습니다.
언급해주실 실험의 경우 matal source를 첨가하게 되므로 이로 인한 pH변화를 가만하시면 되겠습니다. 즉 matal source의 농도가 pH변화를 유발할 것이므로 이를 가만하시면 되겠습니다.
2. pH 조절을 HCl로 했는데, NaCl을 pH 조절 전에 꼭 넣어야 하나요?
NaCl 첨가 여부는 실험 목적에 따라 다릅니다. 사이트에서 계산할 때 ionic strength를 설정할 것인지 여부를 묻는 체크박스가 있었을 겁니다. 이는 실험에 따라 용액의 이온강도를 설정이 필요한 경우가 있고, 설정이 필요하면 이온강도를 입력해서 계산하라는 의미 입니다.
결국 실험의 목적이나 의도에 따라 이 부분은 본인이 판단하셔서 설정하시면 되겠습니다. 필요 없으시면 안하셔도 됩니다.
이상의 내용이 충분치 않으시다면....... 아래 링크를 참고하시기 바랍니다.
http://www.chembuddy.com/?left=pH-calculation&right=toc
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안녕하세요.
제가 이번에 형광으로 Metal sensor 실험을 하려고 하는데,
H2O에서 실험을 해야 해서 버퍼 용액을 만들려고 합니다.
pH 7 에서 실험을 하려고 buffer를 Bis-tris를 사용하려고 합니다.
그런데 논문마다 0.5 M Bis-tris buffer 혹은 0.1 M, 심지어 1mM Bis-tris buffer 를
사용하던데 농도는 어느걸로 해도 상관이 없나요? 상관 없다면 될 수 있으면
낮은 몰농도의 버퍼용액을 사용하려구요.
참고로 제가 하는 실험은 Ligand 10uM 에 Metal을 200eq (2mM) 까지 넣어서
ligand의 형광이 증가하는지 살펴보는 실험입니다.
레시피는 아래 사이트 참고해서 만드는데
저는 Bis-tris 넣고 나서 HCl로 pH 조절하는데 여기는 HCl은 없더라구요.
http://www.biomol.net/en/tools/buffercalculator.htm
To make 500 ml of 0.01 M Bis-tris (pKa=6.46) Buffer: pH= 7
1) Dissolve 1.046 g of Bis-tris base (Mr = 209.2) in approx. 450 ml of pure water.
2) Add 4.426 g NaCl.
3) Titrate to pH 7 at the lab temperature of 25oC with monovalent strong base or acid as needed.
Make up volume to 500 ml with pure water
4) Buffer will, of course, be pH 7.00 at 25oCNaCl을 선택해서 0.01M Bis-tris pH=7 을 만들려고 한다면,
위의 절차대로 해서 만들라고 하는데 저는 2번 단계를 생략하고 바로 3번으로 가서
Bis-tris에 바로 HCl을 소량 넣어서 pH를 조절해서 만들었는데 NaCl을 안 넣어도 되나요?
만약 NaCl을 꼭 넣어야 한다면 왜 넣어줘야 하나요?
두줄요약)
1. Bis-tris Buffer 용액 만들 때 농도를 저농도로 만들어도 되나요?
2. pH 조절을 HCl로 했는데, NaCl을 pH 조절 전에 꼭 넣어야 하나요?
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답변
조민규님의 답변
2011-08-09- 0
참고로, 위에 써있는 monovalent strong base or acid가 우리식으로 하면 1가의 강염기 또는 강산 입니다. NaOH, HCl 등을 쓰라는 표현을 저렇게 쓸 수 있습니다.
-------------------------------------질문-------------------------------------
안녕하세요.
제가 이번에 형광으로 Metal sensor 실험을 하려고 하는데,
H2O에서 실험을 해야 해서 버퍼 용액을 만들려고 합니다.
pH 7 에서 실험을 하려고 buffer를 Bis-tris를 사용하려고 합니다.
그런데 논문마다 0.5 M Bis-tris buffer 혹은 0.1 M, 심지어 1mM Bis-tris buffer 를
사용하던데 농도는 어느걸로 해도 상관이 없나요? 상관 없다면 될 수 있으면
낮은 몰농도의 버퍼용액을 사용하려구요.
참고로 제가 하는 실험은 Ligand 10uM 에 Metal을 200eq (2mM) 까지 넣어서
ligand의 형광이 증가하는지 살펴보는 실험입니다.
레시피는 아래 사이트 참고해서 만드는데
저는 Bis-tris 넣고 나서 HCl로 pH 조절하는데 여기는 HCl은 없더라구요.
http://www.biomol.net/en/tools/buffercalculator.htm
To make 500 ml of 0.01 M Bis-tris (pKa=6.46) Buffer: pH= 7
1) Dissolve 1.046 g of Bis-tris base (Mr = 209.2) in approx. 450 ml of pure water.
2) Add 4.426 g NaCl.
3) Titrate to pH 7 at the lab temperature of 25oC with monovalent strong base or acid as needed.
Make up volume to 500 ml with pure water
4) Buffer will, of course, be pH 7.00 at 25oCNaCl을 선택해서 0.01M Bis-tris pH=7 을 만들려고 한다면,
위의 절차대로 해서 만들라고 하는데 저는 2번 단계를 생략하고 바로 3번으로 가서
Bis-tris에 바로 HCl을 소량 넣어서 pH를 조절해서 만들었는데 NaCl을 안 넣어도 되나요?
만약 NaCl을 꼭 넣어야 한다면 왜 넣어줘야 하나요?
두줄요약)
1. Bis-tris Buffer 용액 만들 때 농도를 저농도로 만들어도 되나요?
2. pH 조절을 HCl로 했는데, NaCl을 pH 조절 전에 꼭 넣어야 하나요?