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HPLC 분석조건을 의뢰자한테 받았습니다.
그쪽에서 분석조건으로 분석한 분석 data 도 받았습니다,
총 run time 은 40분 이며 major는 20분쯤 나옵니다
column 은 그 조건에 있는 같은 column 을 사용하였고,
이동상을 조건대로 만들었습니다.
gradient가 걸리는 이동상 비율입니다.
그런데 분석 물질만 injection 하면, 1.1분에 전부 몰려서 나와버립니다.
20분에는 잔피크조차도 없습니다.
무엇이 문제인지를 모르겠습니다, 이동상을 새로 다시 만들었는데도 같은결과네요.
답변 기다리겠습니다,감사합니다.
- HPLC
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
조윤환님의 답변
2011-08-16- 2
반갑습니다.
질문 내용으로만 봐선 피크가 전혀 나오지 않는 것인지.... 아니면 전반부에 몰려 나오는 것인지 알기 어렵습니다.
말씀하신데로 전반부에 몰려 나오는 거라면 gradient용 이동상 2가지가 서로 뒤밖였을 가능성이 있습니다.
전혀 피크가 나오지 않는 상태라면 인젝터쪽에 문제겠죠.
사실 전혀 피크가 나오지 않을 경우 solvent front 부분만 크게 확대되어 나오기 때문에 앞에 뭉쳐 나온다고 오해하기 쉽습니다. RT가 1분 정도라면 solvent front일 가능성이 큽니다. blank 찍은 것과 비교해서 같으면 피크가 나오지 않고 있다고 판단하시면 되겠습니다.
참고가 되었길.... 바랍니다.
조윤환(brmdolee) 2011-08-16이동상의 조성이 시작부터 유기용매 비율이 꽤 높은 편이군요. 물과 아세토니트릴만 사용한다면 pH의 영향도 아니고.... 좀 난감하네요. 의뢰자 분의 말씀데로라면 ACN 100% 부근에서 피크가 나온다는 말인데....분석자 분의 실험에선 isocratic 부분에서 모두 나와버리니...이동상에도 문제가 없다면.... 전혀 다른 컬럼을 쓰지 않고는 일어날 수 없는 일인듯합니다.
이상욱(swlee9363) 2011-08-16column 도 같은 것이라서 일단은 분석기기를 변경해서 다시 분석해보려고는 하는데
결과가 잘 나왔으면 좋겠네요,
매번 답변 정말 감사드립니다^^ -
답변
김상태님의 답변
2011-08-31- 0
-------------------------------------질문-------------------------------------
HPLC 분석조건을 의뢰자한테 받았습니다.
그쪽에서 분석조건으로 분석한 분석 data 도 받았습니다,
총 run time 은 40분 이며 major는 20분쯤 나옵니다
column 은 그 조건에 있는 같은 column 을 사용하였고,
이동상을 조건대로 만들었습니다.
gradient가 걸리는 이동상 비율입니다.
그런데 분석 물질만 injection 하면, 1.1분에 전부 몰려서 나와버립니다.
20분에는 잔피크조차도 없습니다.
무엇이 문제인지를 모르겠습니다, 이동상을 새로 다시 만들었는데도 같은결과네요.
답변 기다리겠습니다,감사합니다.
-용매 이동상이 잘못하거나 균배 상 시간을 설정하지 않아 보임
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답변
송정민님의 답변
2011-09-01- 0
gradient조건이 뒤쪽으로 갈수록 washing buffer이기 때문에
washing buffer비율이 달라졌을 가능성이 높아요
아니면
HPLC 기기 고유의 특성인데
gradient의 비율이 따로 있거든요..
말로하기 애매한데..이동상의 비율이 한번에 확~바뀌느냐..
아니면 기울기의 크기에 따라서 점진적으로 바뀌느냐..
님의 경우라면,
의뢰자의 HPLC는 점진적으로 바뀌는 건데
님의 HPLC는 확~바뀌는 기기일 가능성이 높네요
-------------------------------------질문-------------------------------------
HPLC 분석조건을 의뢰자한테 받았습니다.
그쪽에서 분석조건으로 분석한 분석 data 도 받았습니다,
총 run time 은 40분 이며 major는 20분쯤 나옵니다
column 은 그 조건에 있는 같은 column 을 사용하였고,
이동상을 조건대로 만들었습니다.
gradient가 걸리는 이동상 비율입니다.
그런데 분석 물질만 injection 하면, 1.1분에 전부 몰려서 나와버립니다.
20분에는 잔피크조차도 없습니다.
무엇이 문제인지를 모르겠습니다, 이동상을 새로 다시 만들었는데도 같은결과네요.
답변 기다리겠습니다,감사합니다.
답변 정말 감사드립니다.
그리고, Blk 를 찍어봤는데 peak 가 없습니다,
원래 분석 RT 에서 나와야하는 분대에는 나오는 peak 가 전혀 없구요,
1분~5분사이에 모든 peak 가 쏟아져 나옵니다
5분동안 water:ACN=35:65(%)로 흐르다가 5분부터 25분까지 ACN 100%로 가는데
자꾸 앞에서 나와서 난감하네요,,