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안녕하세요?
real time PCR을 처음 하게 되었습니다.
주변에 참고할 만한 상황이 안 되어서 질문 드립니다.
시약 및 primer는 Taqman에서 주문을 하였고 target gene 4종류입니다.
처음에 어떻게 샘플들을 나누어서 실험에 들어가야 될지
디자인이 전혀 생각되지 않습니다.
샘플은 3종류로 보통 control과 test용을 PCR tube에 분주할 때 dilution 한다고 하는데
이런 부분들에 대한 개념이 안 잡히는군요.
RT PCR의 경우 a라는 샘플의 cDNA를 만들어서 PCR amplification을 한개의 tube에 넣어서
한 다음 gel에 내려 확인을 하는 것인데요.
real time PCR에서 a라는 샘플의 cDNA를 만들고 난 다음 mastermix 및 primer 넣기 위해
tube 갯수 및 dilution 하는 수에 대해서 일반적인 Taqman 방법에서는 어떻게 디자인 해야 되는지
꼭 알려 주시길 바랍니다. 보통 같은 cDNA로 triple 까지 하는 것인지도 궁금합니다.
- real time PCR
- Taqman
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
김상태님의 답변
2011-08-31- 0
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안녕하세요?
real time PCR을 처음 하게 되었습니다.
주변에 참고할 만한 상황이 안 되어서 질문 드립니다.
시약 및 primer는 Taqman에서 주문을 하였고 target gene 4종류입니다.
처음에 어떻게 샘플들을 나누어서 실험에 들어가야 될지
디자인이 전혀 생각되지 않습니다.
샘플은 3종류로 보통 control과 test용을 PCR tube에 분주할 때 dilution 한다고 하는데
이런 부분들에 대한 개념이 안 잡히는군요.
RT PCR의 경우 a라는 샘플의 cDNA를 만들어서 PCR amplification을 한개의 tube에 넣어서
한 다음 gel에 내려 확인을 하는 것인데요.
real time PCR에서 a라는 샘플의 cDNA를 만들고 난 다음 mastermix 및 primer 넣기 위해
tube 갯수 및 dilution 하는 수에 대해서 일반적인 Taqman 방법에서는 어떻게 디자인 해야 되는지
꼭 알려 주시길 바랍니다. 보통 같은 cDNA로 triple 까지 하는 것인지도 궁금합니다.
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시료에 관게없이 우선 대조군인 b-actin과 시료군의 cdna에 대한 반응수를 게산해서 반응혼합물을 4개의 primer에 대해 각각 시료+1개의 반응물을 한 튜브에 모두 넣고 각각 시료튜브에 분주해서 시작하고 결과는이라반적으로 기기마다 자동으로 ct값이 나옴 그래서 대조군에 대해 약 +/-(1~5)사이의 값을 보정하면 됨 이이상으로 값이 나올 경우 다시 하였야 함
-정학한 용어 사용하기