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HPLC 를 이용하여 formic acid를 분석 할 예정이고
실험실에 INERTSIL/ ODS-3V(Validated),5um Columns 4.6*150mm 제품과
Waters/ Symmetry, C18Column 3.5um, 4.6*7.5mm 제품을 보유중입니다.
여러 자료를 찾아 본 결과 용리액을 0.1%(v) H3PO4 조건으로 만들어 사용하는 것 같은데
워터스 회사에 문의해본 결과 이 조건에 조금의 유기용매 MeOH나 MeCN를 섞어서
사용해야 할 것 같다고는 했는데.. 회사에서도 자세한 분석 조건을 알기 어려웠습니다.
일단 내일 10% 정도 MeOH를 섞은 0.1% H3PO4 용액을 만들어 용리액으로 사용하여
찍어볼 예정인데.. HPLC를 처음사용하여 시료를 분석하는 것이라 어려움이 많네요..
혹시 위 두 컬럼을 이용한 formic acid 분석 조건을 알고 계신다면
참고 말씀 부탁드립니다.
그리고 소량은 유기용매를 섞어야 하는 이유에 대해서도 답변 말씀 부탁드립니다.
- HPLC
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
이상후님의 답변
2011-09-30- 0
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HPLC 를 이용하여 formic acid를 분석 할 예정이고
실험실에 INERTSIL/ ODS-3V(Validated),5um Columns 4.6*150mm 제품과
Waters/ Symmetry, C18Column 3.5um, 4.6*7.5mm 제품을 보유중입니다.
여러 자료를 찾아 본 결과 용리액을 0.1%(v) H3PO4 조건으로 만들어 사용하는 것 같은데
워터스 회사에 문의해본 결과 이 조건에 조금의 유기용매 MeOH나 MeCN를 섞어서
사용해야 할 것 같다고는 했는데.. 회사에서도 자세한 분석 조건을 알기 어려웠습니다.
일단 내일 10% 정도 MeOH를 섞은 0.1% H3PO4 용액을 만들어 용리액으로 사용하여
찍어볼 예정인데.. HPLC를 처음사용하여 시료를 분석하는 것이라 어려움이 많네요..
혹시 위 두 컬럼을 이용한 formic acid 분석 조건을 알고 계신다면
참고 말씀 부탁드립니다.
그리고 소량은 유기용매를 섞어야 하는 이유에 대해서도 답변 말씀 부탁드립니다.
INERTSIL/ ODS-3V에서 formic acid를 분리할 때는, 0.1% H3PO4(v/v)을 이동상으로 하고, 컬럼 온도를 40℃ 정도로 올린 후에 210 nm에서 측정하게 되면 sharp한 peak을 얻을 수 있을 것으로 판단됩니다. 이런 조건은 보통 많이 알려진 조건이며 메탄올같은 유기용매를 쓰지 않더라도 분리하는데 문제 없을 것으로 보입니다. 보통 formic acid 나 acetic acid같은 산성물질들은 reversed phase 에 흡착되는 특징이 있긴 하나 inersil의 특징상 무시할 정도로 흡착이 일어나므로 유기용매를 사용하지 않아도 될 것으로 보입니다. 직접 해 보시기 바랍니다.
그러나 water사의 symmetry C18은 고정상의 silanol group들이 노출되어 있기 때문에 formic acid들이 흡착이 많이 일어날 것으로 보입니다. 따라서 이 컬럼으로는 formic acid 분리가 잘 일어나지 않을 것으로 보입니다. 따라서 이 컬럼은 추천하고 싶진 않습니다. 굳이 사용하시겠다면 메탄올이나 ACN을 이동상에 저 비율로 넣어서 사용해 보세요.
답변 감사드립니다 :) 혹시 inertsil/ ODS-3V 컬럼 사용할때 분석 샘플 제조시 사용하지 말아야할 solvent도 알고계신가요? HPLC용 Water 나 ACN, MEOH 등의 solvent를 사용해도 괜찮을지 궁금합니다.