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- screening assay
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
황현두님의 답변
2011-11-01- 2
RLuc-based screening assay는 Renilla-luciferase를 이용한 (Firefly-luciferase(FLuc)도 있음) screening 방법으로써, 자세한 실험방법은 다양할 수 있으나, 결과적으로 luciferase의 bioluminescence 반응 결과(발광량)를 통해 특정 gene이나 protein의 expession 혹은 function 등을 조사하는 방법입니다.
보통 세포에 Luciferase reporter를 transfection한 후, 특정 조건에서 일정 기간 배양한 후, harvest하여 (lysis 시켜) 특정 substrate와 섞었을 때 발광량을 측정함으로써, luciferase의 activity를 확인합니다.
만약 promotor의 activity가 낮다면 RLuc mRNA가 적게 발현될 것이고, activity가 높다면 많이 발현되겠지요. 이 때 특정 signaling pathway에 의해 조절기작이 발현된다면, 이러한 gene expression이 조절될 것이고, 그 결과는 상기와 같은 방법으로 발광량을 측정함으로써 알수 있는 것입니다.
이러한 Luc-based screening assay는 drug discovery 과정에서 널리 쓰이는 screening assay 방법 중 하나로써, 제품도 많이 나와있고, 이를 응용한 다양한 방법들도 계속 개발되고 있습니다.
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논문을 보다가..
궁금해서 여쭤봅니다.RLuc-based screening assay는 무엇인가요??material and method를 봤는데 이해가 잘 되지 않습니다.ㅠㅠ원리가 무엇인지 가르쳐주세요.. -
답변
DELETED님의 답변
2011-11-01- 2
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논문을 보다가..
궁금해서 여쭤봅니다.RLuc-based screening assay는 무엇인가요??material and method를 봤는데 이해가 잘 되지 않습니다.ㅠㅠ원리가 무엇인지 가르쳐주세요..>Re
보통 Luciferase assay는 특정 유전자의 promoter를 Luc gene 앞에 클로닝하여, Luc enzyme 활성을 리포터로서 사용하는데 쓰임니다. GFP, CAT, B-gal 등 다양한 리포터 유전자들 중 하나이며, 각각의 효소활성을 이용합니다. 또한, Renilla Luc 는 Firefly Luc 를 리포터로 사용할 경우, 그 transfection efficiency 를 보정해주기 위해 control 로도 사용됩니다. 이러한 경우 dual-luc system을 사용하면 한번에 측정이 가능하므로 흔히 쓰이고 있습니다.
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답변
김상태님의 답변
2011-12-30- 0
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논문을 보다가..
궁금해서 여쭤봅니다.RLuc-based screening assay는 무엇인가요??material and method를 봤는데 이해가 잘 되지 않습니다.ㅠㅠ원리가 무엇인지 가르쳐주세요..- Renilla-luciferase를 이용한 Firefly-luciferase(FLuc)나 Gluc가 있고 이런 유전자가 코딩된 벡터에 의해 세포내로 일시적을 형질이입시켜 세포내에서 발현되면 luciferin의 기질을 첨가하여 분석하는 법을 말함