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안녕하세요
DiI cell labeling에 대하여 질문을 드립니다.
이게 cell membrane을 염색한다고 되어 있는데 정확히 membrane의 어느 부분을 염색하나요?
그리고 염색 후 confocal을 찍어보면 membrane만 염색되어 있는게 아니고 세포 내부에도 dye가 퍼져 있던데(uptake된 양상으로요. 염색 직후에 찍어도 그랬습니다.) 왜 그런걸까요? 제가 뭔가를 잘못한 걸까요?
고수님들의 조언을 부탁드립니다. 간절히...
참고할 만한 논문까지 알려주시면 복받으실거에요. 내공을 드릴 수 있으면 제가 주화입마를 입을 정도의 내공을 드릴텐데...
새해 복 많이 받으세요
- dii
- 세포염색
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
장성재님의 답변
2012-01-04- 0
사용하시는 세포에 따라서 반응시간을 조절하실 필요가 있습니다.
어떤 세포를 사용하셔서 반응조건을 어떻게 설정하셨나요?
DiI는 lipophilic tracer 물질로써 세포막의 지질성분과 공유결합이 아닌 hydrophobic interaction에 의해 섞이는 것입니다. 따라서 세포막과 결합한 후 세포 내부로 uptake 될 수 있습니다. 세포 내부로의 유입이 보이신다면 대략 37도 조건에서 5분 이하로 사용하시고 반응이 미약할 경우 4도 (냉장) 조건에서 좀더 반응을 시키시는 것이 좋을 듯 싶습니다.
Molecular probe의 data sheet을 첨부합니다. 참고하세요.
-------------------------------------질문-------------------------------------
안녕하세요
DiI cell labeling에 대하여 질문을 드립니다.
이게 cell membrane을 염색한다고 되어 있는데 정확히 membrane의 어느 부분을 염색하나요?
그리고 염색 후 confocal을 찍어보면 membrane만 염색되어 있는게 아니고 세포 내부에도 dye가 퍼져 있던데(uptake된 양상으로요. 염색 직후에 찍어도 그랬습니다.) 왜 그런걸까요? 제가 뭔가를 잘못한 걸까요?
고수님들의 조언을 부탁드립니다. 간절히...
참고할 만한 논문까지 알려주시면 복받으실거에요. 내공을 드릴 수 있으면 제가 주화입마를 입을 정도의 내공을 드릴텐데...
새해 복 많이 받으세요
정말 감사합니다. B16cell을 사용해서 시행했는데 약 15분간 두었습니다. 그럼 반응시간을 좀더 줄여보겠습니다. 감사합니다.