2012-03-20
org.kosen.entty.User@35158303
신영인(akingpost)
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안녕하세요.
FDG를 이용해 세포 내 노화관련인자를 확인하는 실험을 진행하고 있습니다.
형광 dye를 붙여 fluorometer를 이용해 ex485nm/em535nm에서 측정합니다.
과정은 세포를 seeding하고 자극을 준 다음 고정한 뒤 FDG를 넣고 24hr동안 배양하여
상층액을 떠서 black plate에 옮겨 찍으라고 논문에 나와있는데,
상층액만 찍고 형광현미경으로 관찰하니까
바닥에 붙은 세포들에도 형광을 띄고 있어서
상층액만 찍는 것이 맞는 지 모르겠습니다.
그리고 Cell을 lysis시켜서 전부를 찍을려고 하면 고정 단계가 없어야되는데
고정을 하지 않았을 때 매염이 잘안되며 세포의 상태가 24hr동안 변할까봐
어떤식으로 실험을 진행해야될 지 모르겠습니다.
질문을 요약하면
1) FDG를 정량하는 정확한 방법 --- 상층액만 찍기 or Cell lysis시켜서 찍기
2) 고정 유무 --- FDG를 넣어 24hr 반응 전 고정이 꼭 필요한지
kit를 참고해보았을 때 Cell을 회수해서 FDG를 넣고 반응 후 측정한다고 되어 있었습니다.
이 실험을 진행해보신 분들께 조언을 구합니다. 감사합니다.
- FDG
- SA- βG activity
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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