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다시 문의 드립니다.
첨부파일과 같이 분석을 진행 하려고 합니다.
파일에 나타난 것과 같이 C18 컬럼에 100% DI water + 0.5% phosphoric acid
+ 1.5g/L pentane sulfonic acid 사용하려고 합니다.
여기서 pentane sulfonic acid를 검색해도 나오지 않아서 이와 유사한
1-pentanesulfonic acid sodium salt를 사용하면 되는 건가요??
그리고 위와 같은 이동상 조건에서 pentane sulfonic acid을 제외하고 100% DI water + 0.5% phosphoric acid 만으로 측정을 해도 괜찮을까요??
- 분석
- HPLC
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
조윤환님의 답변
2012-03-22- 0
반갑습니다.
앞서 등록하신 질문에 문헌만 첨부하시면 되었을 텐데..별도의 질문을 올려 주셨군요.
Guanidine 분석이 목적이시군요. 앞서 등록하신 aminoguanidine carbonate 대한 질문과도 관련이 있고요.
aminoguanidine carbonate에 대한 질문에선 일반론적인 답변은 가능하지만 연구사례를 검색한 결과가 너무 적어서 답변을 드리지 못했습니다만 이번 기회에 같이 답변드려 보겠습니다.
첨부해주신 문헌을 보니 역시 1-pentanesulfonic acid sodium salt를 잘못 표기한 것으로 보입니다. 0.5% 인산을 사용하기 때문에 pentane sulfonic acid 대신 1-pentanesulfonic acid sodium salt를 사용한다 하더라도 pentane sulfonic acid를 사용한 것과 동일한 효과를 나타냅니다. pH 때문이죠.
앞선 질문의 답변에서 말씀드렸다시피 본 분석조건은 ion-pair chromatography의 분석 조건입니다. guanidine 처럼 극성이 강한 물질은 일반적인 RP컬럼(예를 들어 C18, C8)으로 분석하기 매우 어려운 물질입니다. 이유는 극성이 너무 강하기 때문에 비극성인 고정상과 상호작용이 너무 약하기 때문입니다. 상호작용이 약하기 때문에 거의 solvent front와 비슷한 RT에 나옵니다. 뭔가 고정상과 상호작용을 해야 분리가 이루어지는데..... 그것이 여의치 않은 겁니다.
이러한 극성 분자들을 분석하기 위해 개발된 기법이 바로 1-pentanesulfonate같은 ion pairing reagent를 사용하는 ion-pair chromatography입니다. ion pairing reagent는 analyte와 고정상 사이에서 상호작용을 증가시켜주는 역할을 합니다. 때문이 이를 사용하면 자연히 RT도 증가하고 분리도 됩니다.
찾으신 조건이 확실하다면 1-pentanesulfonic acid sodium salt를 사용하시면 되겠습니다.
참고로 요즘은 ion-pair chromatography 외에도 극성물질 분석에 강점을 가지고 있는 HILIC column이 개발되어 많이 사용되고 있습니다. ion-pair chromatography가 개발되기 전에는 pre-column derivatization을 이용한 분석법이 사용되기도 했습니다.(참고 J Chromatogr Sci (1984) 22 (3):99-103.doi: 10.1093/chromsci/22.3.99)
제 생각에 님께서는 분리 조건 뿐만 아니라 검출 조건에 대해서도 신경을 많이 쓰셔야 하겠습니다. UV검출기로는 검출이 어려기 때문이죠. RI, ELSD 등을 사용하셔야 가능하겠군요. 유도체화를 하면 UV도 가능하겠지만....
guanidine과 aminoguanidine carbonate을 동시에 분석하실 생각이라면 Ion chromatography도 고려해볼 수 있는 방법 중 하나라고 생각합니다.
참고하시길...
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파일에 나타난 것과 같이 C18 컬럼에 100% DI water + 0.5% phosphoric acid
+ 1.5g/L pentane sulfonic acid 사용하려고 합니다.
여기서 pentane sulfonic acid를 검색해도 나오지 않아서 이와 유사한
1-pentanesulfonic acid sodium salt를 사용하면 되는 건가요??
그리고 위와 같은 이동상 조건에서 pentane sulfonic acid을 제외하고 100% DI water + 0.5% phosphoric acid 만으로 측정을 해도 괜찮을까요??
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답변
조윤환님의 답변
2012-03-22- 0
첨부파일
첨부 문헌을 다시 살펴보니 Cogent 라는 브랜드에서 자사 컬럼을 홍보하기 위해 만든 분석예군요.
첨보는 브랜드인데..... type C C18 이라는 실리카를 사용했다고 하네요. 이런 경우 일반적인 C18컬럼으로 동일한 결과를 도출하기 어려울 수 있을 것 같네요. 일반적으로 길이와 내경 및 입자크기가 같은 C18 컬럼을 사용하면 동일한 결과를 얻을 것으로 기대하지만..... 그렇지 못한 경우도 허다 합니다.
세부 스펙에 따라 분석 결과가 달라지기도 하거든요. 예를 들어 실리카의 순도나 입자형태, 세공의 크기, 카본로딩 값, end-capping 여부 등 분석에 영향을 줄 수 있는 요소들은 많습니다. 비슷한 결과를 줄 수는 있지만 일부 성분들이 분리가 되지 않을 수도 있다는 뜻입니다.
결론적으로 첨부해주신 문헌의 분석사례가 type C C18 컬럼의 분석능을 보여주는 전형적인 사례라면 다른 컬럼으론 동일한 결과를 도출하기 어려울수도 있겠습니다. 하지만 그렇지 않을 수도 있으니 확인을 해야겠죠.
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파일에 나타난 것과 같이 C18 컬럼에 100% DI water + 0.5% phosphoric acid
+ 1.5g/L pentane sulfonic acid 사용하려고 합니다.
여기서 pentane sulfonic acid를 검색해도 나오지 않아서 이와 유사한
1-pentanesulfonic acid sodium salt를 사용하면 되는 건가요??
그리고 위와 같은 이동상 조건에서 pentane sulfonic acid을 제외하고 100% DI water + 0.5% phosphoric acid 만으로 측정을 해도 괜찮을까요??
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답변
조윤환님의 답변
2012-03-22- 0
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일하는 중간 중간 짬을 내어 답변을 하다 보니 시간이 좀 뜹니다. 이해 바랍니다.
ion chromatography 장비를 운영 가능하시다면 다음 문헌을 참고하십시요.
참고문헌: http://products.metrohm.com/getAttachment.axd?attaName=30d2e163-b81a-419c-a07e-5e8f9a8d3ebb
ㅐㅜ
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파일에 나타난 것과 같이 C18 컬럼에 100% DI water + 0.5% phosphoric acid
+ 1.5g/L pentane sulfonic acid 사용하려고 합니다.
여기서 pentane sulfonic acid를 검색해도 나오지 않아서 이와 유사한
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그리고 위와 같은 이동상 조건에서 pentane sulfonic acid을 제외하고 100% DI water + 0.5% phosphoric acid 만으로 측정을 해도 괜찮을까요??
답변 정말 감사드립니다. 도움 많이 되었습니다.
그리고 Ion chromatography 분석방법에 대해서 좀 알려주실수 있으신가요??
저희 회사에 양이온 컬럼과 본기기가 있기 때문에 측정할 수 있을거 같습니다.