2012-05-21
org.kosen.entty.User@2e5d87b9
이주현(mollina)
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너무 궁금합니다..ㅠㅠ
현재 암세포를 이용해서 DHE,DCF staining연습과 SA-b-gal연습을 하고있습니다.
저희 실험방에서 계속 몇년동안 하던 방식으로 똑같이...protocol대로 하고있고,
잘 해왔다고 생각했는데....
전혀 염색이 안되고 있습니다...ㅠㅠ
특히나 노화를 보는 실험인데 이건뭐 셀이 뭉쳐서 스트레스 받아서 생기는 ROS인지
제가 시약처리를 해서 cell에서 노화되어 생기는 ROS인지 알 수 었을만큼 입니다.
그래서 제 질문은
1. 6 well에 cell심을때 어떻게 하면 골고루 예쁘게 잘 펼쳐서 자라나요??
(이것만 벌써 한달째인데;;;;;셀 디바이딩 할때 태핑도 많이 해 주고, cell뿌리고 난 다음에 골고루 분산시켜준다고 흔드는것도 오래하는데..ㅠㅠ왜그렇게 뭉쳐서 크는지..ㅠㅠ)
2. 노화 staining보는 중인데요...어떻게 하면 잘 할 수 있을까요??ㅠㅠ
지금 한달째 이것만 연습하고 있는데..ㅠㅠ한번도 성공한게 없네요..ㅠㅠ
- DHE
- DCF
- SA-b-gal
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2012-05-22- 0
제 생각에는 배양하시는 세포를 언제부터 혹은 passage 몇 번째의 세포인지 확인하시기 바랍니다. 수개월 혹은 일정 기간동안 계대배양 해온 세포와 이전 세포가 똑같을 것이라고 착각하시는 분들이 많은데, 전혀 다른 세포로 바뀌었을 가능성이 많습니다. 기본적으로 세포배양을 통해서 세포실험을 하실 경우, 최초 구입한 세포주를 이용하여 master cell bank를 제작하시고, 이 master cell bank 중의 하나를 이용하여 working cell bank를 제작하여 실험에 사용하셔야만 재현성이 있는 실험에 성공하실 확률이 높아지는 것입니다. ？은 실험 프로토콜을 사용하고 같은 시약을 사용할 경우 실험결과에 차이가 생기는 것은 간혹 사용하는 기질의 제품 롯트에 따른 변화가 있을 수도 있지만, 장기간의 in vitro 배양에 의해 세포의 형질이 조금씩 변화한다는 사실을 간과하셔서 발생하는 경우가 종종 있답니다.