2012-08-18
org.kosen.entty.User@609d8968
정신구(dropsboy)
- 1
안녕하세요.
MTT에 관련되서 질문을 드리고자 합니다.
일단 제가 키우는 cell line은 NSC34 cell line 인데요..
96well에 seeding 해서 cell viability를 H2O2를 처리 해서 관찰을 하고 있습니다.
헌데 여기서 문제는 처음에 H2O2 처리농도를 10uM 20uM 50uM 100uM 200uM 까지 처리를
하였을 때는 원하는 결과를 얻을수 있었는데요..
200uM 이상을 처리하고 나서 부터는 H2O2의 처리 효과를 볼수가 없습니다..
cell death에 변화가 일어나지 않다가 10mM 을 처리 하였을때 모두 죽는 ...
어떤 점이 문제 일까요? H2O2 를 NSC34 cell 에 처리해보신 분들은 농도를 몇 정도 잡으시나요?
참고로 저는 96well 에 3x10(4) cell/well 정도로 seeding을 하고 있는데요.. 그리고
H2O2 처리 시간은 30min으로 고정하고 있습니다.
이점도 문제가 될수 있나요.. 빠른답변 부탁 드릴께요..
- MTT
- NSC34
- H2O2
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
김재용님의 답변
2013-10-29- 0
1. 200uM 이상을 처리하고 나서 부터는 H2O2의 처리 효과를 볼수가 없다는 말이 세포가 죽지 않느다는 말인가요? 저의 짧은 생각으로는 200 uM 농도 이하에서는 세포에 damage을 줬는데... 200 uM 농도 이상에서는 damage를 주지 않는다는 것 같은데... 먼저 생각할것은 과산화수소인것 같습니다. 과산화수소는 민감해서 미리 만들어 주는것 보다는 실험할때마다 신선하게 제조하는게 좋습니다. 과산화수소의 상태를 확인해보시는게 좋을것 같습니다. 2. 10mM 을 처리 하였을때 모두 죽는다. 먼저 과산화수소의 IC50값을 구하고 본 실험으로 들어가시는게 맞을것 같습니다. 왜냐하면 선생님께서 그 세포의 cell death를 apoptosis 쪽으로 보시는것 같은데... 세포가 다 죽으면 그것은 necrosis로 넘어가기 때문에 적절한 농도와 처리 시간을 선택하시는게 좋을꺼 같습니다.