지식나눔

pENTR D/TOPO vector를 이용한 cloning

pENTR vector를 사용해서 cloning을 하려고 하는데요, insert를 증폭할때 forward primer에 CACC GAATTC ATG ~~ CACC와 ATG사이에 EcoR1 site를 넣었는데, 이렇게 하면 cloning이 안되나요? Kozak seqeunce가 정확히 뭔가요? PCR로 insert를 증폭후, gel extraction이나 PCR purification한 뒤, vector와 바로 반응하면 cloning되는게 맞나요? 그뒤에 one shot competent E.coli를 사용하여 transformation해주었는데요, S.O.C media를 -80도에 얼렸다가 녹여서 썼는데, 이것도 문제가 될까요? 조언좀 해주세요 ㅠㅠㅠ
  • pENTR
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    강상우님의 답변

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