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지식나눔

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유전자와 고분자 conjugation 확인 PAGE 조건

2012-10-08 org.kosen.entty.User@17b85037 심용호(rodys)
  • 1
유전자와 고분자 conjugation 확인을 위한 PAGE 조건을 찾습니다. amino modified 유전자와 (분자량 ~10000짜리) succinimide activated mPEG 5K, 20K conjugation 시키고 있습니다. 논문을 보면 쉽게 결합되는 반응인데, 이후에 확인하는 방법이 정확히 나와 있지 않습니다. 이미 해보시거나 조건 아시는분 있으시면 부탁드립니다. 이미 알고 있는 정보는, 0.025M Tris, 100V 에서 된다는것. 좀더 자세한 프로토콜을 알고 싶습니다. 미리 감사드립니다.
  • DNA
  • conjugation
  • PAGE
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답변 1
  • 답변

    정재현님의 답변

    2012-10-09
    • 0

    첨부파일

    네 반응은 일반적으로 아주 쉽게 진행되는 것으로 저도 알고 있습니다. 다만 확인을 위해 0.1M Tris-HCl에서 overnight 하시면 됩니다. 아래 참고논문의 supporting data 에 나와있는 것을 붙여드립니다. 5´ Amino-modified oligonucleotide (1 μmol) was reacted with succinimide activated PEG (5 μmol) in 500 μl 0.1 M sodiumtetraborate buffer (pH 8.0) at room temperature for 48 hours. The crude reaction mixture was analyzed and purified using 8% denaturing PAGE. The product band was extracted from 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0) overnight. It was then filtered and dialyzed against MQ-water using a membrane with a MWCO of 1000 g/mol for 24 hours. Subsequently, it was lyophilized yielding 98% ss DNA-b-PEG(5K) diblock copolymers and 95% ss DNA-b-PEG(20K) diblock copolymers. The purity and the molecular weight of the products were confirmed by reverse phase HPLC (Figure 3) and MALDI-TOF mass spectrometry. 보시면, 8% denaturing PAGE 를 사용하시고, product band는 0.1M Tris-HCl 에서 하시면 됩니다. 참고문헌 Advanced Materials "Polymerase Chain Reaction as an Efficient Tool for the Preparation of Block Copolymers" Meryem Safak, Fikri E. Alemdaroglu, Yi Li, Erhan Ergen, Andreas Herrmann
    답변수정
    네 반응은 일반적으로 아주 쉽게 진행되는 것으로 저도 알고 있습니다. 다만 확인을 위해 0.1M Tris-HCl에서 overnight 하시면 됩니다. 아래 참고논문의 supporting data 에 나와있는 것을 붙여드립니다. 5´ Amino-modified oligonucleotide (1 μmol) was reacted with succinimide activated PEG (5 μmol) in 500 μl 0.1 M sodiumtetraborate buffer (pH 8.0) at room temperature for 48 hours. The crude reaction mixture was analyzed and purified using 8% denaturing PAGE. The product band was extracted from 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0) overnight. It was then filtered and dialyzed against MQ-water using a membrane with a MWCO of 1000 g/mol for 24 hours. Subsequently, it was lyophilized yielding 98% ss DNA-b-PEG(5K) diblock copolymers and 95% ss DNA-b-PEG(20K) diblock copolymers. The purity and the molecular weight of the products were confirmed by reverse phase HPLC (Figure 3) and MALDI-TOF mass spectrometry. 보시면, 8% denaturing PAGE 를 사용하시고, product band는 0.1M Tris-HCl 에서 하시면 됩니다. 참고문헌 Advanced Materials "Polymerase Chain Reaction as an Efficient Tool for the Preparation of Block Copolymers" Meryem Safak, Fikri E. Alemdaroglu, Yi Li, Erhan Ergen, Andreas Herrmann
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