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bradford 방법으로 단백질 정량하기 실험을 하는데요. 1.교수님께서 흡광도 측정시 측정할 용액의 종류가 다를 경우 에탄올과 증류수로 cell을 세척하고 같을 경우엔 증류수로만 cell을 세척하라고 가르쳐 주셨는데, 에탄올로 세척하는 경우가 무엇인가요? 그리고 증류수로 세척할 경우 미량이지만 cell에 남아있는 증류수때문에 용액이 희석될 가능성도 있을 것 같은데 그럼 정확한 흡광도 측정이 어렵지 않나요? => 교수님께서 말씀하신 내용이 정확히 어떤것인지 이해가 되지 않아서 답변드리기 쉽지 않네요. 굳이 세포를 세척해야 하는 이유가 뭔지 잘 몰라서 원론적인 말씀을 드릴게요. 세포의 성장곡선을 그리거나 혹은 세포의 적정 수를 흡광도를 이용하여 결정할 때는 blank (영점을 잡아주는 background 기준)에 세포가 존재하는 용액을 그대로 넣어주시면 됩니다. 어느 용액에 들어있던지 간에 시료를 넣어주는 cuvette내의 용액이 blank와 동일하면 됩니다. 예를 들어, 배지에 세포가 들어있으면 세포가 없는 배지를 넣어주면 되는겁니다. 그러면 당연히 두번째 질문에 대한 답도 되리라 보는데요. 만약 세척과정이 반드시 필요한 실험이라면 어차피 측정시료가 세포이므로 세척과정에서 들어간 용액들은 blank에서 맞춰줘야합니다. 2. 단백질 표준용액을 만들때 BSA를 buffer에 희석하여 사용하라고 하였는데, 여기서 의미하는 buffer의 의미가 무엇인가요? 증류수인가요? 증류수 말고는 무엇이 있나요? => 앞선 분께서 pH에 대한 것이라 말씀하셨는데요. 생화학적인 의미이에서 buffer란 목적하는 분자의 '주변환경'이라 보시면 될 거 같네요. 아미노산이 zwitter ion이라서 pH를 buffering할수 있기 때문에 생화학책에 많이 등장하는데요. 그 외에도 생체 내에는 buffering기능을 담당하는 것들이 많습니다. 아주 쉬운 예가 위에서 낮은 pH에 소화된 것들이 장으로 내려올 때는 그 낮은 pH를 높여 중성으로 만들어주는 췌장액의 sodium bicarbonate도 buffering기능이 있습니다. 즉, 주변환경을 비슷하게 만들어주는 모든것을 buffer로 보시면 됩니다. 따라서 BSA를 녹이는 용액도 측정하려는 단백질이 녹아져 있는 용액으로 buffer를 만들어주시면 주변환경이 동일해 지겠지요? 그래서 단백질을 추출한 용액이 최적의 BSA를 녹이는 buffer가 될 수 있습니다. 단, 대개 많은 buffer가 물을 이용해서 만들고 또 BSA를 stock으로 만들어 놓고 사용하시려면 편의상 증류수를 많이 이용하는 편이지요. 3. 단백질 정량 실험을 할때 BSA가 없을 경우 단백질 표준용액으로 사용할 수 있는 것은 무엇이 있나요? => 최초 기준으로 잡는 단백질이 무엇이냐에 따라 단백질 정량실험을 하면 다른 것을 이용할 수도 있을 것입니다. 절대치를 알고자 하는 것이라면 당연히 농도를 정확히 알고있는 단백질(여기서는 BSA 혹은 다른 어떤것도 순수하고 안정하다면 가능)을 써야하구요. 시료간 상대적 정량만을 원한다면 어떤것도 가능하리라 봅니다. 그런데 BSA는 다른 단백질에 비해 상대적으로 값싸고 쉽게 얻을 수 있고 또 무엇보다도 전세계적으로 공통으로 쓰고 있는 단백질이니 누구에게나 본인의 실험이 객관성을 인정받으려면 사용해야 할 거 같네요. 도움이 되셨기를....^^

첨부자료를 잘 참고하셔서 실험하시면 될것같네요. 그리고 버퍼는 물이아닌 pH를 조절해주는 용액입니다.