2012-12-10
org.kosen.entty.User@7cfdc457
신학섭(guguban)
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지식인분들 안녕하세요.
제가 동물 조직에서 ATP, ADP, AMP, Creatin 등을 정량 분석하려고 하는데요.
HPLC로 분석한 논문을 참고 해서 protocol을 짜고 실험하려 하는데
Standard ATP...등등을 넣고 위치를 먼저 잡아야 하더군요. 그래서
시약을 구매해야 하는데
sigma 에서 ATP 시료를 찾아보니
Adenosine 5′-triphosphate disodium salt hydrate 만 있더라구요.
아무래도 안정화 하려고 sodium hydrate 형태로 있는 것 같은데 이것을 그대로 써도 될까요?
ATP 뿐만 아니라 다른 ADP, AMP등도 그런식으로 판매 하는 것 같아서
혹시 ATP 등을 HPLC 하신 분들 있으면 조언을 구하고 싶습니다.
- HPLC
- ATP
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답변 1
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답변
조윤환님의 답변
2012-12-11- 0
반갑습니다. 우선 ATP, ADP, AMP, Creatin의 HPLC 분석에 대한 귀하의 질문에 결론부터 말씀드리자면 생각데로 하셔도 무방하다 입니다. 이유는 HPLC 분석 자체가 액체, 즉 용액상태에서 이루어지기 때문 입니다. 이동상과 표준액을 제조하시다보면 특정 pH의 완충액을 사용하게 되고, 당연히 해당 pH에 맞는 형태로 물질들이 전환되기 때문입니다. 다만 정량분석을 하시려면 표준물질로 사용할 물질들의 정확한 함량(assay)를 확인하실 필요가 있습니다. 왜냐하면 sigma에서 판매하는 ATP 같은 경우만봐도 hydrate 형태이지만 물이 결정수처럼 일정하게 포함되어 있는 형태가 아닙니다. 순도(purity)만 표시되어 있기 때문에 이를 함량으로 오인할 수 있습니다. 규격과 성적서를 확인해보면 순도는 98.5% 이상으로 되어 있으나 수분이 12% 가량인 것으로 표기되어 있습니다. 그 외에도 결정화용매도 포함되어 있는 것으로 확인되네요. 즉 이는 시료 100mg을 취할 경우 순수하게 취할 수 있는 ATP의 양은 수분과 결정화용매 및 순도를 고려한 양이 된다는 의미 입니다. 잘 알아서 하시겠지만 정량 분석시 흔히 범할 수 있는 실수라서 한번 언급해 봅니다.