2013-02-04
org.kosen.entty.User@6a48396e
신소림(sorim0917)
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Rat intestinal α-glucosidase를 이용하여 항당뇨실험을 하고자합니다.
프로토콜에 100mg의 Rat intestinal acetone powder에 3mL의 0.9% NaCl을 넣고
Ice bath에서 30초씩 12번 초음파처리하여 균질화한 다음
원심분리(10,000×g, 30분 4℃) 후 상등액 사용한다고 되어있는데요,
반드시 4℃의 냉장원심분리기를 사용해야 하나요?
일반 원심분리기에서는 온도 때문에 활성이 많이 떨어질까요?
갑자기 실험을 진행하닥보니 냉장원심분리기가 준비되지 않아 고민입니다.
혹시 일반 원심분리기로 실험을 진행해보신 분 계신다면 경험담 좀 부탁드립니다.
- α-glucosidase
- enzyme
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이홍섭님의 답변
2013-02-14- 0
-일단 전 rat는 아주 오래전에 한번 실험했을뿐이라 기억이 나지 않지만 온도 때문에 실활은 잘 안됐던 것으로 기억합니다. 따라서 얼음에 충분히 냉각한 후에 가능한 빨리 원심분리해주시면 될듯합니다. -시약에서 파는 yeast 유래 a-glucosidase는 얼음 위에서도 아주 빠르게 실활됩니다. 따라서 항상 그때 그때 활성을 확인하시기 바랍니다. -혹시 a-glucosidase inhibitor 스크리닝 용 효소라면 rat 보다 porcine 효소를 강력하게 추천합니다. 사람과 아주 유사하기 때문입니다. 도살장 가서 부탁하면 아주 따뜻한 곱창을 살수 있구요 가지고 오자마자 슬라이드로 안쪽을 잘 분리해서 사용하시면 실온에서도 전혀 실활되지 않는 효소액을 얻을수 있습니다. 같은 추출액으로 amylase 등의 활성도 확인 가능 합니다.