2013-04-05
org.kosen.entty.User@63b3bec0
권정희(buny89)
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효소 정제액에 존재하는 미생물 제균방법에 대한 효과적인 방법을 알고 싶습니다.
일반적인 제균법(여과법이나 방사선 처리)을 사용했으나 여전히 미생물이 검출되고 있습니다.
이런 방법 말고 효소 활성도는 유지시키면서 효과적으로 제균하는 방법을 알고 계신분 도움을 구하고자 합니다.
- 효소 추출액
- 미생물 제균
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
장성재님의 답변
2013-04-08- 5
>효소 정제액에 존재하는 미생물 제균방법에 대한 효과적인 방법을 알고 싶습니다. >일반적인 제균법(여과법이나 방사선 처리)을 사용했으나 여전히 미생물이 검출되고 있습니다. >이런 방법 말고 효소 활성도는 유지시키면서 효과적으로 제균하는 방법을 알고 계신분 도움을 구하고자 합니다. 오염균은 동정하셨나요? 제균필터를 사용했어도 오염균이 검출되었다면 포자형성 등의 이유가 있을 수도 있으니 윗분의 답변 중 2번째분의 의견대로 탈염, 즉, gel filtration 한번 더 해보심이 어떠실지요? 아니면, 효소액의 농도가 너무 높아서 제균필터링이 제대로 안되었을 경우도 있으니 (멤브레인 필터가 망가질 경우) 희석 후 제균 필터 처리해주시고 다시 농축하심이 어떠실지? 내열성 효소액이 아니라면 열을 가하는 것은 비추입니다. -
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정석희님의 답변
2013-04-08- 3
질의 제목 : '효소 정제액내 존재하는 미생물 제균방법' 질의 내용 : 효소 정제액에 존재하는 미생물 제균방법에 대한 효과적인 방법을 알고 싶습니다. 일반적인 제균법(여과법이나 방사선 처리)을 사용했으나 여전히 미생물이 검출되고 있습니다. 이런 방법 말고 효소 활성도는 유지시키면서 효과적으로 제균하는 방법을 알고 계신분 도움을 구하고자 합니다. 답변: 일반적으로 0.2um pore filter를 써서 여과를 하면 미생물은 존재하지 않는데, 여과과정에 문제가 있었던 것 같습니다. 만약에 지속적으로 문제가 발생한다면 아래 방법을 추천합니다. Autoclave를 하는 것입니다. autoclave를 하면 미생물이 거의 모두 죽는다고 보면 됩니다. 하지만 gram positive 미생물은 pore를 형성하기에 생존할 수도 있습니다. 효소를 만드는 미생물군에 G+가 많다면, 1시간 정도 autoclave를 하면 전부 죽습니다. 문제는 autoclave를 하면 enzyme activity가 떨어진다는 것입니다. 1시간 하면 활성이 더 많이 떨어지겠지요. enzyme의 종류에 따라 그 영향이 다르기에, autoclave를 한 이후에 효소활성도를 측정하여 실험에 적용하면 됩니다. -
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김성훈님의 답변
2013-04-08- 3
완전히 멸균 상태를 유지하는 것은 어렵지 않을까요? 단백질 정제시 멸균된 상태에 하지 않는 한은 말이죠. 그래서 미생물을 최대한 줄이고 번식을 막기 위해서 Sodium azide를 넣거나..4도씨 이하에서 보관하죠. 어떤 단백질을 어떤 용도로 쓰느냐에따라서 달라지겠지만 항생제도 하나의 방편이 되겠지만.. Enzyme kinetics를 보는데 아마 장애가 있지 않을 듯 합니다. 가장 최선의 방법은 마지막 단계에서 desalting을 하면서 최대한 멸균된 물과 튜브를 쓰는게 좋겠죠. 하지만 멤브레인을 이용해서 필터링 하는 것은 비추천 입니다. 멤브레인에 단백질이 흡착되니까 로스가 많을 겁니다. 도움 되셨길 -
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정일래님의 답변
2013-04-08- 3
코센으로부터 연락을 받고 답변드립니다. 효소정제액에 존재하는 미생물을 제균하시기 위해서는 가장 좋은 방법이 여과법입니다. 효소정제액의 경우 말 그대로 효소 (단백질)을 함유하고 있기 때문에 고온멸균법이나 방사선 처리, 염농도증가법, 투석, 항생물질 처리 등을 하시면 효소 분자가 변성되거나 파괴될 수 있으며, 잔존 독성 물질로 인해 나중에 직접 음용하시기 어렵습니다. (방사선의 경우 효소가 파괴될 정도의 방사선을 조사하지만 않는다면 그보다 낮은 농도의 방사선량을 조사하셔도 미생물 제균을 훌륭하게 하실 수 있지만, 조건을 잡기 위해서는 실험을 하셔야 합니다) 효소액을 안정하게 유지시키시면서 미생물만 제거하시기를 원하신다면 0.2uM membrane filter를 사용하셔서 제거하시는 것이 가장 무난합니다. 질문자께서 이미 여과법을 사용하셨다고 하셨고, 그런데도 미생물이 검출되었다고 하셨는데, 사실 정확히 어떻게 실험을 하셨는지 현재로서 파악이 어렵습니다. 생물학 전공을 하시는 분이 아니고, 아마 일반인이신 것 같은데요, 주변의 아무 대학 생물학과에 가셔서 문의하시면 간단하게 미생물을 제균해 주실 수 있으실 겁니다. 제균을 완벽하게 하시기 위해서는 무균시설에서 하셔야 하고, 기타 오염을 방지할 수 있는 대책이 함께 수반되어어야 합니다. 실험의 목적이나 방법, 이유가 명확하지 않아 일반적인 답변만을 드려 죄송합니다