2013-07-09
org.kosen.entty.User@140d88e0
김세원(arbatross)
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MCS가 2개인 Vector가 coexpression을 위해서 만들어졌다고 제품설명서 간단하게 나와있는데...
다른 특징들이 있을까요??
coexpression시 2plasmid과 발현정도 차이는 있을까요???
- MCS
- vector
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답변 1
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답변
성기문님의 답변
2013-07-10- 0
하나의 plasmid를 통해서 두가지 유전자의 발현을 보기위해 만들어진 것이라 생각되는데 기본적으로 유전자의 ORF만을 넣을 생각이라면 MCS 앞쪽으로 promoter가 각기 존재하는지 또 어떤 강도를 가진것인지..(아마도 비슷한 것일거라 예상됩니다만..) 그리고 terminator가 존재하는지를 확인하셔야 할겁니다. 상용화되어 판매가 되는 것이라면 그 정보가 자세히 들어있을 것이니 꼼꼼히 읽어보셔야 할겁니다. 그러나 무엇보다 format은 한 plasmid로 두 유전자의 발현을 유도하는것을 모두 지원할 지라도 세포내에 두 유전자를 가진 한 plasmid가 들어간다고 해서 두 단백질의 발현이 동일하게 나온다는 보장은 없습니다. 그건 확실하지는 않지만 여러가지 이유가 제시되고 있는데 만약 promoter가 동일한 activity를 갖는다면 그중에서도 mRNA의 안정성이 가장 큰 요인이 될 것입니다. 또 두 plasmid에 각각 원하는 유전자를 넣어 세포로 넣을 경우 특정 plasmid에 대한 preference를 가질 확률이 높아 동등한 발현을 볼 수 없습니다. 이런 이유로 MCS를 두개 가진 plasmid가 개발된것이라 생각되는 군요. 두 단백질 발현을 위한 목적이라면 비슷한 활성을 지닌 항체로 확인해 보시는 것이 좋을 듯합니다. vector test라면 하나의 epitope로 tagging 된 비슷한 size의 유전자를 subcloning하여 비교해 보시면 좋을 것입니다. 좋은 성과 있으시길...