2013-08-07
org.kosen.entty.User@3c94aaee
김경윤(k2k2y1)
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실험 문의를 드릴려고 합니다.
biotinylation된 protein이 있는데요~!
biotin-proteinA을 끊어줄 방법이 궁금합니다.
기본적으로 pH를 통해 끊어도 되긴 하겠지만.... 다른 방법이나 kit이 있는지 궁금합니다.
- biotin
- biotin protein
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답변 1
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답변
배기현님의 답변
2013-08-08- 0
첨부파일
안녕하세요 biotinylation된 protein A (biotin-protein A)를 끊어줄 방법에 대해서 질문하셨는데요. 몇몇 회사(Sigma, GenScript 등)의 정보를 확인해보니 biotin이 단백질에 공유결합(amide bond)로 붙어있다고 하네요. 이러한 amide bond는 매우 낮은 pH (pH 4 이하) 또는 매우 높은 pH (pH 10 이상)에서 오랫동안 처리해주어야 끊어지는 매우 안정한 공유결합입니다. 이러한 극단적인 pH 조건에서는 단백질도 변성되어서 원래의 활성을 잃어버릴 것입니다. 제가 알고 있는 바로는 amide bond를 끊는 kit는 없는 것으로 알고 있습니다. 실험 목적이 어떤것인지는 모르겠습니다만 biotin-protein A의 biotin 쪽과 결합하는 어떤 물질(아마도 avidin)과의 결합, 즉 biotin-avidin 결합을 끊어도 된다면 과량의 biotin이나 avidin을 넣으면 됩니다. 또는 biotin-protein A의 protein A 쪽과 결합하는 어떤 물질(아마도 IgG)과의 결합, 즉 protein A-IgG 결합을 끊어도 된다면 과량의 protein A를 넣어주면 competative bonding에 의하여 결합을 끊을 수 있습니다. 또는 이러한 단백질-단백질 결합은 SDS나 Tween 같은 계면활성제를 넣어주어도 끊을 수 있습니다.