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지식나눔

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Yeast에서 RNA 추출시cell lysis 방법

2013-11-12 org.kosen.entty.User@1d2d0ff 성다래(ekfo87)
  • 2
Yeast에서 RNA를 추출하려고 합니다.

yeast cell lysis 방법을 고르려고 합니다.

사정 상 cell을 -70도씨에 보관 후 RNA prep을 해서 enzyme을 이용한 방법은 불가한다고 합니다.

그래서 bead를 이용한 방법을 사용하려고 합니다.

RNA 추출 kit는 QIAGEN 제품인 RNeasy mini kit를 사용하는데,

여기서는 enzyme 방법 외에는 Tissue lyser 기기를 사용하여 cell을 mechanical discruption합니다.

저희 실험실에는 tissue lyser라는 기계도 없고 cell lysis를 위한 sonicator도 없습니다.

그냥 washing 하기 위한 sonicator와 vortex, bead(yeast cell용, 0.45-0.55mm, sigma, g8772)를 가지고 yeast cell을 discruption 할 수 있을 까요?

이미 vortex를 사용하여 1분씩 4번 최고속도로 vortex하여 cell lysis 시켜 RNA 추출을 해보았으나

uv 흡광도와 denaturing agarose gel을 running 해본 결과 RNA가 보이지 않았습니다.

효과적인 yeast cell lysis 방법이 없을까요??????????????????

 
  • yeast
  • RNA
  • lysis
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
  • 답변

    황현두님의 답변

    2013-11-13
    • 0
    참고가 되시길 바랍니다.

    http://www.lifetechnologies.com/us/en/home/references/ambion-tech-support/rna-isolation/general-articles/cell-disruption-getting-the-rna-out.html


     
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    조재형님의 답변

    2013-11-19
    • 0
    cell양 늘여서 해보시면 분명히 나옵니다.
    지금까지  vortex로 해서 안나온적 없으니 믿고 cell양 늘려서 다시 해보세요.
    답변수정
    cell양 늘여서 해보시면 분명히 나옵니다.
    지금까지  vortex로 해서 안나온적 없으니 믿고 cell양 늘려서 다시 해보세요.
    성다래(ekfo87) 2014-01-27

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