2014-03-12
org.kosen.entty.User@6637220c
정기백(nabluedust)
- 1
안녕하세요!
저는 비드에 특정물질을 붙이는 실험을 배우고 있는 학생입니다.
다름이 아니라 Avidin-biotin 결합에 대해 배웠는데 굉장히 강력한 affinity를 가졌다고 들었습니다.
그래서 제가 가진 비드에 Avidin-biotin 결합을 이용하여 Antibody를 고정시키고 싶은데
그러기에는 2 가지 조건이 선행되어야 하더라구요.
1. Bead 표면에 Avidin 을 어떻게 붙이는가.
2. Biotin 과 Antibody를 어떻게 반응 시키는가.
구글학술검색 및 여러 bioconjugation 문헌을 찾아 본 결과,
Biotinylated antibody 라고해서 따로 회사에서 취급하는 물품들이 존재하고,
또한 biotin 과 antibody를 conjugation 하는 방법이 존재하더라구요.
하지만 그 방법이 쉽지 않아서 보다 쉬운 방법이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다!!
그리고, Avidin 을 bead에 붙이는 방법에 대해서는 아직까지 찾지 못하였는데
붙이는 방법이 있는 지 알려주시면 감사하겠습니다!!
좋은하루되세요!!!
저는 비드에 특정물질을 붙이는 실험을 배우고 있는 학생입니다.
다름이 아니라 Avidin-biotin 결합에 대해 배웠는데 굉장히 강력한 affinity를 가졌다고 들었습니다.
그래서 제가 가진 비드에 Avidin-biotin 결합을 이용하여 Antibody를 고정시키고 싶은데
그러기에는 2 가지 조건이 선행되어야 하더라구요.
1. Bead 표면에 Avidin 을 어떻게 붙이는가.
2. Biotin 과 Antibody를 어떻게 반응 시키는가.
구글학술검색 및 여러 bioconjugation 문헌을 찾아 본 결과,
Biotinylated antibody 라고해서 따로 회사에서 취급하는 물품들이 존재하고,
또한 biotin 과 antibody를 conjugation 하는 방법이 존재하더라구요.
하지만 그 방법이 쉽지 않아서 보다 쉬운 방법이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다!!
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좋은하루되세요!!!
- avidin
- biotin
- pda
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이배훈님의 답변
2014-03-12- 0
modified된 biotin은 많이 존재합니다. (첨부화일)-conjugation
원하시는 항체와 반응 시킬 기능기(SH, COOH, NH2 등등) 를 먼저 확인 해야 modified 된 biotin을 선택하고 회사에서 제공된 프로토콜로 반응을 하면 됩니다. 항체 자체의 활성을 손상시키지 않고 modified 된 biotin과 결합하려면 항체에 대한 정확한 정보가 필요합니다. 방법이 다양한 것은 항체별로 단백질별로 다르기 때문입니다.
문헌에 나타난 합성방법 소개 (avidin-bead)
Immobilisation of avidin on polystyrene beads
Preparation of avidin coated polystyrene beads was carried out as reported earlier [ 7 ]
with some minor modifications. The beads were coated with bovine serum albumin (BSA) by incubating them in 0.05 M phosphate buffer, pH 7.5, containing 0.2% BSA for 2h with gentle stirring. They were then washed thoroughly and placed in a 2% solution of glutaraldehyde for 6 h. The activated beads were washed free of the aldehyde and immersed in a solution containing avidin (50ug /mL), not optimised, however, far in excess and incubated overnight at room temperature. The beads were then washed thoroughly and remaining active sites blocked using 0.05 M phosphate buffer containing 0.2% grycine and 2% skimmed milk powder. Finally, the avidin coupled beads were washed several times and stored at 4°C, immersed in 0.05 M phosphate buffer containing 0.2% BSA, 0.1% Tween-20, 0.9% NaCl and preservatives.
[7] DIAMANDIS, E.P., CHRISTOPOULOS,T.K The Biotin - (Strept) Avidin system: Principles and Application in Biotechnology, Clin.Chem. 37 (1991) 625-636.