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지식나눔

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NAD+에서 NADH로 전환되는 효율 측정

2014-04-08 org.kosen.entty.User@607e2143 김재민(skyblue36)
  • 1
안녕하세요.

실험진행하다가 여쭤볼게 있어서 이렇게 글을 남깁니다.

다름이 아니라, 논문을 참고하여 실험을 진행하고 있습니다.

실험은 NAD+에서 NADH로의 전환효율을 보는 것인데,

sigma에서 파는 NAD+, NADH는 H+만 차이가 있는 것을 판매하고 있지않습니다.

그래서 NADH를 구매하여 standard를 구하여 농도를 측정할 수도 없습니다.

그런데 논문에서는 그냥 340nm에서 농도를 측정하고 있다고 하는데,,

어떤식으로 농도를 측정해야할지 막망하여 이렇게 글을 남기게 되었습니다.

읽어주셔서 대단히 감사하며 조언구하겠습니다.^^
  • NADH
  • regeneration
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답변 1
  • 답변

    이배훈님의 답변

    2014-04-08
    • 0

    첨부파일

    시그마 제품  참고
    NAD/NADH Quantification Kit Catalog Number MAK037 

    The NAD/NADH Quantification Kit provides a 
    convenient tool for sensitive detection of the 
    intracellular nucleotides, NAD and NADH, and their 
    ratio without the requirement to purify NAD/NADH from 
    samples. This assay is specific for NAD and NADH, 
    and does not detect NADP nor NADPH. NADtotal (NAD 
    and NADH) or NADH are quantified in a colorimetric 
    assay (450 nm).

    NADH은  450nm 에서 fluorescence가 있음 / NAD+ 없음


    또 한가지 방법 추가  (standard curve를 사용하지 않고 계산하는 방법)

    The Beer-Lambert Law 이용

    A=ebc
    NADH  an extinction coefficient of 6,220 M−1cm−1  
     (339nm)
    A is absorbance (no units)
    e ( extinction coefficient) is the molar absorbtivity with units of L mol-1 cm-1 (M−1cm−1)
    b is the path length of the sample - that is, the path length of the cuvette in which the sample is contained. (centimetres.)
    c is the concentration of the compound in solution, expressed in mol L-1

    A,e,b, 알기게 c(농도를 ) 계산할 수 있습니다.
     
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    시그마 제품  참고
    NAD/NADH Quantification Kit Catalog Number MAK037 

    The NAD/NADH Quantification Kit provides a 
    convenient tool for sensitive detection of the 
    intracellular nucleotides, NAD and NADH, and their 
    ratio without the requirement to purify NAD/NADH from 
    samples. This assay is specific for NAD and NADH, 
    and does not detect NADP nor NADPH. NADtotal (NAD 
    and NADH) or NADH are quantified in a colorimetric 
    assay (450 nm).

    NADH은  450nm 에서 fluorescence가 있음 / NAD+ 없음


    또 한가지 방법 추가  (standard curve를 사용하지 않고 계산하는 방법)

    The Beer-Lambert Law 이용

    A=ebc
    NADH  an extinction coefficient of 6,220 M−1cm−1  
     (339nm)
    A is absorbance (no units)
    e ( extinction coefficient) is the molar absorbtivity with units of L mol-1 cm-1 (M−1cm−1)
    b is the path length of the sample - that is, the path length of the cuvette in which the sample is contained. (centimetres.)
    c is the concentration of the compound in solution, expressed in mol L-1

    A,e,b, 알기게 c(농도를 ) 계산할 수 있습니다.
     
    이배훈(lbh217) 2014-04-20

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    김재민(skyblue36) 2014-04-20

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