2014-04-29
org.kosen.entty.User@2159d64f
김자민(jamine789)
- 2
안녕하세요.
사수없이 실험을 진행중인 석사과정입니다.
다름이 아니라, 조언 및 방법을 얻고자 이렇게 글을 쓰게 되었습니다.
cloning을 해서 enzyme을 과발현시키는 실험중인데요.
subunit이 4개로 구성되어있습니다.
근데 문제는 크기가 총 300kDa 정도여서
각각의 subunit을 발현시켜서 섞어서 assembly를 유도할 생각입니다.
방법조차몰라 이렇게 조언 및 방법을 여쭙습니다.
읽어주셔서 감사합니다.^^
사수없이 실험을 진행중인 석사과정입니다.
다름이 아니라, 조언 및 방법을 얻고자 이렇게 글을 쓰게 되었습니다.
cloning을 해서 enzyme을 과발현시키는 실험중인데요.
subunit이 4개로 구성되어있습니다.
근데 문제는 크기가 총 300kDa 정도여서
각각의 subunit을 발현시켜서 섞어서 assembly를 유도할 생각입니다.
방법조차몰라 이렇게 조언 및 방법을 여쭙습니다.
읽어주셔서 감사합니다.^^
- protein
- assembly
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 2
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답변
권오병님의 답변
2014-04-30- 0
난해한 문제이군요...
source가 세균인지 진핵세포인지 모르겠으나
개인적 소견으로는 다음과 같습니다.
1. 세균 유래 복합체라면 operon 전체를 클로닝하여 발현하는 것이 가능하고,
2. 진핵세포 유래 단백질이라면 각 단위체를 생산
1) 모두 soluble form일 경우, 최적 완충액 선별하여 assembly
2) 일부 또는 모두 inclusion bodies일 경우, refolding 방법 사용
--> disulfide bonds가 있을 경우 난이도가 더 높아짐
3. 참고로, 대장균에서 백신용 virus-like particle(VLP) prodcution 관련 문헌을 참고하시면
도움이 될 수 있을 것입니다.
도움이 되시길 바랍니다. -
답변
이호진님의 답변
2014-04-30- 0
효소가 어떤 것인지 알려주시면, 답변이 조금 쉽지 않을까요?
효소가 종류가 많지요..
그리고 실험 목적이 4개의 unit이 합체 해야지만 하는 것인지요?