2014-08-18
org.kosen.entty.User@256f339c
김자민(jamine789)
- 3
안녕하십니까.
석사과정에 있는 학생입니다.
다름이 아니라, 논문을 참고하여 실험을 진행하는 중에
여쭤볼게있어서 이렇게 글을 남기게되었습니다.
논문에서 HPLC column을 C-18 gel column을 사용하였습니다.
근데 저희 연구실에서 gel column을 보유하지않고 있어
그냥 C-18 column으로 사용해보려고 합니다.
많이 차이가 있는지 여쭙습니다.
오늘 하루도 즐거운 하루 되십시오.^^
석사과정에 있는 학생입니다.
다름이 아니라, 논문을 참고하여 실험을 진행하는 중에
여쭤볼게있어서 이렇게 글을 남기게되었습니다.
논문에서 HPLC column을 C-18 gel column을 사용하였습니다.
근데 저희 연구실에서 gel column을 보유하지않고 있어
그냥 C-18 column으로 사용해보려고 합니다.
많이 차이가 있는지 여쭙습니다.
오늘 하루도 즐거운 하루 되십시오.^^
- HPLC
- Column
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
이경인님의 답변
2014-08-18- 1
일반적으로 gel이라는 표현은 silica gel을 의미하는 경우가 대부분입니다.
즉 ODS(C18)이나 ODS gel은 동일하다고 보시면 됩니다. Maker에 따라서 gel을 붙여주는 상표명을 가지는 경우가 있고 그냥 C18 또는 C8 등의 충진제 표현만을 하는 경우가 있습니다.
다만 column maker별로 또는 동일한 maker라도 제품별로 ODS기반의 고정상을 사용하는 제품의 분리능이나 이론단수, 구조적 특성이 각각 다른 경우가 있으므로 분석하고자 하는 성분에 적합한 ODS(C18) column을 따로 구입하셔야 하는 경우가 발생될 수도 있으실 것입니다.
동시에 분석하시고자 하는 성분이 비교적 적거나(1~5가지 정도), RT겹침이 없는 성분이라면 우선 가지고 있으신 column으로 분석을 시행해 보시고 결정하시기 바랍니다. -
답변
조윤환님의 답변
2014-08-18- 0
반갑습니다.
혹시나 해서 HPLC분석 조건 첨부를 부탁드렸습니다.
논문에 언급된 컬럼은 일반적인 C18컬럼 입니다. 질문시 분석할 시료를 언급했다면 혼동을 피할 수 있었을 것 같습니다.
NAD+/NADH 분석은 실험예가 매우 많아서 참고할 자료가 매우 많습니다. 다른 유사 자료를 참고하셨다면 쉽게 파악할 수 있는 문제였습니다.
ZORBAX-C18 column은 Agilent사에서 판매하는 Zorbax family column 중 하나로 특별히 지금은 매우 세분화된 라인업을 가지고 있습니다. 초기 상품명인 것으로 볼 때 2000년대 중반에 출판된 논문을 참고하신 것으로 추측됩니다.
NAD+와 NADH 를 C18 역상컬럼으로 분석하면 극성이 높은 NAD+가 먼저 나오고 그 뒤에 NADH 피크가 관찰됩니다. C18컬럼이 없을 때는 C8컬럼을 사용해도 비슷한 결과를 얻을 수 있습니다.
일반적으로 최근에는 대사체 분석 등의 필요성이 커지면서 AMP, GMP, ADP, ATP 같은 유사 관련물질을 함께 동시에 분석할 수 있는 분석법도 소개되고 있는 추세입니다.
위와 같은 분석조건을 예로 들면 다음과 같습니다.
Column: ZORBAX Eclipse XDB-C8 (4.6 x 75 mm, 3.5 µm) (Agilent Part No. 966967-906)
Mobile Phase: 93% 50 mM Sodium Phosphate (pH 7.0 with Phosphoric Acid) /
10 mM Tetrabutyl Ammonium Bromide : 7% Acetonitrile
Injection volume: 1 µL, 1.0 mL/min, 35°C
Det.: UV (254 nm)
참고하시길..
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답변
서병일님의 답변
2014-08-20- 0
< C-18 gel column 이나 C-18 gel column 은 같은 것입니다. 표현이 다를뿐>
ㅇHPLC에서 쓰는 컬럼은 대부분 C-18 gel column 과 고분자를 분리할때쓰는 SEC(size exclusion chromatography) 컬럼으로 대별됩니다..
ㅇC18 은 담체로 sephadex, biogel(agarosegel), sepharose 등에 C가 18개 붙은 물질을 결합시켜
non-polar 하게 만든 역상(reverse) 컬럼입니다. 따라서 시료분석시 극성물질이 먼저 용출되어 나오고 비극성물질은 나중에 나옵니다. 유기물질분리, 단백질, 혈장분리 등에 많이 씁니다.
ㅇ컬럼의 종류는 메이커마다 조금씩 다르나 일반적으로 sepadex LH- gel column,
µ-bondapack C18 gel column, MCI-CHP20 gel column 등이 있습니다. 분석물의 특성(주로 극성)을 대충 파악하여 선택할 필요가 있습니다. (컬럼 선택은 영화과학 등에 문의하면 정보를 얻을 수 있습니다.) 그러나 일반적으로 µ-bondapack C18 (gel) column 을 많이 쓰지요
ㅇ <참고> SEC 컬럼은 고분자 분석용으로 만든 것으로서 분자량이 작은 것 부터 먼저 나오고 큰 것은 나중에(수십분-2시간) 분리되어 나옵니다. 고분자 분자량을 알 필요가 있을시 표준분자량을 가진 고분자 몇개를 분리 용출하여 시간에 따른 곡선을 얻은 후 분자량을 모르는 임의의 고분자의 분자량을 알 필요가 있을때 사용합니다
도움되기 바랍니다
네. 자세한 답변 감사드립니다.
새로운 사실을 알게 되었네요. 즐거운 하루되십시오.^^