2014-09-05
org.kosen.entty.User@770967e
김자민(jamine789)
- 3
안녕하십니까.
대학원 석사과정에 있는 학생입니다.
연구를 진행하던 중에 궁금증이 생겨 게시판에 글을 적습니다.
다름이 아니라, 저는 FPLC / HPLC를 모두 사용하고 있습니다.
하지만 사용중에 궁금증이 생겨 이렇게 글을 적게 되었습니다.
FPLC의 경우에는 셋팅부터 교육까지 받아 어느정도 구동원리를 숙지하고 있습니다.
하지만 HPLC의 경우 어떻게해서 분리가 된다는 것은 알겠는데, 실험을 하던중에
궁금증이 생겼습니다.
FPLC의 경우에는 sample을 injection하고 sample이 loop에 머물고
모드를 바꿔줘서 Buffer A가 흘러 column에 binding이 되고
buffer B를 이용하여 elution하는 것으로 알고 있습니다.
하지만 HPLC(영린기기)의 경우에는 실험을 할때 별도의 a buffer없이
이동상만 흘려 detection을 하고 있습니다. 그럼 autosampler에서 sample이
injection될때 sample을 압력으로 흘려줘서 column에 binding을 시키고
이동상이 흘러 elution을 하는 것인가요?
즐거운 한가위 되십시오.^^
대학원 석사과정에 있는 학생입니다.
연구를 진행하던 중에 궁금증이 생겨 게시판에 글을 적습니다.
다름이 아니라, 저는 FPLC / HPLC를 모두 사용하고 있습니다.
하지만 사용중에 궁금증이 생겨 이렇게 글을 적게 되었습니다.
FPLC의 경우에는 셋팅부터 교육까지 받아 어느정도 구동원리를 숙지하고 있습니다.
하지만 HPLC의 경우 어떻게해서 분리가 된다는 것은 알겠는데, 실험을 하던중에
궁금증이 생겼습니다.
FPLC의 경우에는 sample을 injection하고 sample이 loop에 머물고
모드를 바꿔줘서 Buffer A가 흘러 column에 binding이 되고
buffer B를 이용하여 elution하는 것으로 알고 있습니다.
하지만 HPLC(영린기기)의 경우에는 실험을 할때 별도의 a buffer없이
이동상만 흘려 detection을 하고 있습니다. 그럼 autosampler에서 sample이
injection될때 sample을 압력으로 흘려줘서 column에 binding을 시키고
이동상이 흘러 elution을 하는 것인가요?
즐거운 한가위 되십시오.^^
- HPLC
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
서병일님의 답변
2014-09-06- 1
autosampler에서 sample이 루프에 injection된 후 이동상으로 씻겨 나가면서 컬럼으로 들어갑니다.
수고하세요 -
답변
이경인님의 답변
2014-09-06- 1
원리적으로는 비슷하지만 FPLC의 binding의 개념하고는 조금 다르긴 합니다.
FPLC의 경우는 말씀하신것 처럼 초기에 sample 중의 protein을 전용 column에 binding하는 과정과 elution하는 과정이 구분되어 있는데, 이로 인해 실제 분리에 사용되는 용매는 단일 용매에 가깝습니다.
그러나 일반적인 HPLC는 이동상으로서 단일 용매(isocratic)를 쓰는 경우도 있고 두 가지 이상의 용매(binary~quaternary...)를 사용하는 분석도 있어서 용매를 혼합시켜주는 과정이 있습니다. 혼합과정은 column에 통과하기 전에 이루어져야 하기 때문에 이동상을 흘려주는 pump가 두개 이상인 경우나 하나의 pump에 용매 혼합장치를 부착하여 쓰는 경우 등이 있으며, column을 통과하면서 분리를 하는 과정 중에 용매의 조성이 바뀌는 경우가 많습니다. HPLC에서 injection되는 sample은 FPLC와 같이 binding의 과정이 별도로 구분되어 있지 않기 때문에 이미 column으로 흐르고 있는 이동상 용매와 함께 column으로 들어가게 되어 있는 구조입니다. -
답변
조윤환님의 답변
2014-09-10- 1
FPLC와 HPLC 모두 LC의 일종으로 장치의 구성과 구동 원리 모두 동일하다고 볼 수 있겠습니다.
다만 컬럼에서 분리가 일어나는 메커니즘이 조금 다른 것 뿐입니다.
HPLC에서도 buffer를 이동상으로 사용하기도 합니다. 따라서 어느 한 가지만 정확히 알면 그 차이점만 파악하면 됩니다.