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지식나눔

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리포좀 합성관련해서 질문드립니다.

2014-10-01 org.kosen.entty.User@3b81d6f4 이준성(letmedream)
  • 4
안녕하세요
리포좀 관련해서 고수님들께 질문드립니다.
제가 리포좀 내부에 carboxyfluorescein(CF)을 loading하고자 하는데요.
문헌들을 찾아보면 보통 100mM농도의 solution으로 hydration을 한 다음 column을 내려서 loading되지 않은 CF를 제거하던데요. CF solution을 만들때 사용한 buffer가 제각각이더라구요.
혹시 PBS에 CF100mM을 녹인다음 이걸로 lipid cake을 hydration하고 다시 PBS로 column을 내리면 괜찮을까요? 삼투압에 의한 영향이 있을 수도 있다는 얘길 들어서요. CF 100mM in PBS solution이 삼투압이 많이 높아지나요? 
고수님들의 답변 부탁드립니다.
감사합니다.
  • 리포좀
  • 삼투압
  • carboxyfluorescein
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답변 4
  • 답변

    조상준님의 답변

    2014-10-06
    • 2
    위 실험의 경우 physiological buffer를 사용하라고 하는데 일반적으로 Hepes buffer를 많이 사용하는 것으로 알고 있습니다.  Hydration condition에서 pH7.5 와 Temp condition (10 to 15°C above their gel to liquid-crystalline phase transition temperatures of your liposome)을 지킨다면 PBS도 크게 문제는 없으리라 봅니다. Un-encapsulated CF를 제거하는 방법은 문헌에서는 Un-encapsulated CF was removed by gel-filtration through a Sephadex G-50 mini-column equilibrated with a 20 mM Hepes buffer pH 7.5 containing 0.1 M Na2SO4 or 0.15 M NaCl.라고 합니다. 여기서 key는 room temp에서 제거하는데 있습니다. 10 to 15°C above their gel to liquid-crystalline phase transition temperatures에서 hydration을 시키고 제거할 때는 room temp에서 제거하는 것이 핵심이고 삼투압에 대한 영향은 고려하지 않아도 된다고 봅니다.
     
    답변수정
    위 실험의 경우 physiological buffer를 사용하라고 하는데 일반적으로 Hepes buffer를 많이 사용하는 것으로 알고 있습니다.  Hydration condition에서 pH7.5 와 Temp condition (10 to 15°C above their gel to liquid-crystalline phase transition temperatures of your liposome)을 지킨다면 PBS도 크게 문제는 없으리라 봅니다. Un-encapsulated CF를 제거하는 방법은 문헌에서는 Un-encapsulated CF was removed by gel-filtration through a Sephadex G-50 mini-column equilibrated with a 20 mM Hepes buffer pH 7.5 containing 0.1 M Na2SO4 or 0.15 M NaCl.라고 합니다. 여기서 key는 room temp에서 제거하는데 있습니다. 10 to 15°C above their gel to liquid-crystalline phase transition temperatures에서 hydration을 시키고 제거할 때는 room temp에서 제거하는 것이 핵심이고 삼투압에 대한 영향은 고려하지 않아도 된다고 봅니다.
     
    이준성(letmedream) 2014-10-06

    감사합니다. 제가 딱 원하는 내용입니다.

  • 답변

    김준오님의 답변

    2014-10-02
    • 1
    많은 경우, fluorescet dye로 hydrophilic agent를 사용할 경우에는, 말씀하신 것처럼 lipid film을 hydration시킨 다음, dialysis bag(tube)를 이용하여 liposome 내부에 loading되지 못한 dye molecule들을 제거하기도 합니다.
    이때 해당 dye는 통과하되 제조한 liposome은 통과하지 못하는 pore size를 갖는 dialysis tube를 이용하여 리포좀 용액을 dialysis bag 속에 넣고, 동일한 buffer solution 속 dialysis bag을 침적시킨 상태에서 magnetic stirrer로 천천히 교반하면서 충분한 시간(1~2일) 동안 dialysis 해 주면 됩니다.
    위와 같은 방법도 있으니 고려해 보시기 바랍니다.
    답변수정
    많은 경우, fluorescet dye로 hydrophilic agent를 사용할 경우에는, 말씀하신 것처럼 lipid film을 hydration시킨 다음, dialysis bag(tube)를 이용하여 liposome 내부에 loading되지 못한 dye molecule들을 제거하기도 합니다.
    이때 해당 dye는 통과하되 제조한 liposome은 통과하지 못하는 pore size를 갖는 dialysis tube를 이용하여 리포좀 용액을 dialysis bag 속에 넣고, 동일한 buffer solution 속 dialysis bag을 침적시킨 상태에서 magnetic stirrer로 천천히 교반하면서 충분한 시간(1~2일) 동안 dialysis 해 주면 됩니다.
    위와 같은 방법도 있으니 고려해 보시기 바랍니다.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    김상태님의 답변

    2014-10-02
    • 1
    리포좀이나 다른 담체라도 FITC나 형광플로브에는 COOH기가 있으면 CONJUGATED시키는 방법에 의해서 잘 담지할수 이는데 주로 edc와 TE buffer나 TBE buffer를 사용하여 column에  협착시키고 비흡착된 비결합 CF를 제거하는법이 있을수 있음
    답변수정
    리포좀이나 다른 담체라도 FITC나 형광플로브에는 COOH기가 있으면 CONJUGATED시키는 방법에 의해서 잘 담지할수 이는데 주로 edc와 TE buffer나 TBE buffer를 사용하여 column에  협착시키고 비흡착된 비결합 CF를 제거하는법이 있을수 있음
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    김상태님의 답변

    2014-10-02
    • 1
    일반적으로 형광염료가 부착시킨 리포좀은 화학적으로 FITC나 RITC에는 COOH가 있어 리포좀의 기능기에 아민 이나 다른 기를 링커시켜 흡착한 후 칼럼(밀리포어나 일반 plasmid 분리 컬럼을 이용하여 분리가능함
    답변수정
    일반적으로 형광염료가 부착시킨 리포좀은 화학적으로 FITC나 RITC에는 COOH가 있어 리포좀의 기능기에 아민 이나 다른 기를 링커시켜 흡착한 후 칼럼(밀리포어나 일반 plasmid 분리 컬럼을 이용하여 분리가능함
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