2014-10-08
org.kosen.entty.User@74f2c794
김응배(dmdqo4150)
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안녕하세요.
이식용 생체조직중 소나 돼지의 피부에서 표피층과 진피층을 분리하기 위한 가장 좋은 방법은 무엇이 있을까요?
1. 국내 특허나 논문등의 문헌을 찾아보면 1M NaCl 처리하는 방법과 트립신, 터몰리신, 디스파아제 등의 처리등의 방법이 나와있는데요 이외 물리적으로나 화학적인 다른 방법은 없는지요?
2. 진피내 탈세포(무세포)를 진행하려합니다. SDS, 트리톤 X-100, 트윈 20, 40, 60, 80, 글리세롤외에 탈세포 방법은 무엇이 있을까요?
혹시 해보신분이나 다른 참고될만한 문헌있으면 첨부좀 부탁드립니다.
도움좀 주세요.
- 이종조직
- 탈세포
- 표피제거
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
이승준님의 답변
2014-10-09- 1
첨부파일
일반적으로 skin bioopsy (Human or other mammalian species)로 부터 세포를 분리해 내는 방법은 말씀하신 것 처럼, trypsin, dispase (or collagenase)를 포함한 배양액으로부터, primary cell을 분리한 다음, 표피를 구성하는 keratinocyte와 진피의 대부분을 구성하는 fibroblast를 분리/배양하기 위해, 각기 다른 최적의 배지를 활용합니다. 물론 표피와 진피내 다른 세포 형태들이 존재합니다만 구성하는 비율이 아주 작고, 이를 각각 분리/ 배양하고자 한다면, 다른 최적의 배지들이 필요해 보입니다.
자가/동종/이종 피부세포를 분리/배양하여, 이식에 활용하고자 할 때에는 keratinocyte sheet 또는 keratinocyte (또는 dermal fibroblast) suspension을 이식 부위에 적용합니다. 실제로, 이러한 graft 방법은 치료의 목적으로 임상에서도 많이 적용되고 있고, 국내/국외에서 제품으로도 출시되어 있는 것으로 알고 있습니다.
정확한 protocol을 찾아드릴 수는 없겠지만, 대략적인 과정은 다음과 같습니다.
1. 적출한 피부에서 표피층과 진피층을 제외한 지방 및 부속기관들을 물리적으로 제거한다.
2. 조직을 chopping 한 후, Trypsin/collagenase(or dispase)를 포함한 배양액이 담긴 spining flask를 이용하여 여러번에 걸쳐 세포를 분리해 낸다.
3. keratinocyte / fibroblast 최적의 배지로 분리 배양하여 expansion 한다.
아직까지 Rheinwald JG, Green H 가 확립한 keratinocyte 분리 배양법이 여러 곳에서 널리 응용/활용되고 있으니, 참조하시면 좋을 것 같습니다.
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답변
김동수님의 답변
2015-12-16- 1
해당내용을 상업적으로 적용하고 있는 대표적 바이오사는 최근 코스닥에 상장한 피부세포치료제 전무사 태고싸이언스입니다. 컨택해보시면 좋은 내용을 아실 수 있을 것으로 보입니다. 도움이 되셨기를 바랍니다.