2014-11-20
org.kosen.entty.User@70da832b
이인재(caesar1106)
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안녕하세요.
제목 그대로 liposome을 SEM으로 확인할 때, Sampling 방법이 궁금해서
질문드립니다.
liposome은 DW에 콜로이드 상태로 있는데,
이것들을 단순하게 동결건조를 시키면 structure가 망가질것 같고
SEM을 찍기위해 fixation같은 방법이 필요할것 같습니다.
그런데, 마땅한 프로토콜이 없네요...
size는 DLS로 확인했을 때, 100nm 정도인데
모양을 최대한 유지하면서 SEM을 찍으려면
어떤 방법으로 하는게 좋을까요???
답변 부탁드립니다...
제목 그대로 liposome을 SEM으로 확인할 때, Sampling 방법이 궁금해서
질문드립니다.
liposome은 DW에 콜로이드 상태로 있는데,
이것들을 단순하게 동결건조를 시키면 structure가 망가질것 같고
SEM을 찍기위해 fixation같은 방법이 필요할것 같습니다.
그런데, 마땅한 프로토콜이 없네요...
size는 DLS로 확인했을 때, 100nm 정도인데
모양을 최대한 유지하면서 SEM을 찍으려면
어떤 방법으로 하는게 좋을까요???
답변 부탁드립니다...
- liposome
- SEM
- sampling
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
김상태님의 답변
2014-11-21- 1
Environmental scanning electron microscopy (ESEM) 으로 리보조옴의 구조를 분석시 사용하는데 이 장비의 조건은 전자총을 high vacuum (10−6 Torr)의 partial vacuum (10 Torr) 으로 챔버에서 유지하게 하여 관찰하여 촬영한 데이터를 사용하면 됨 (McKinlay et al., 2004 and Muscariello et al., 2005).
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답변
이민경님의 답변
2014-11-28- 1
경험상 가장 좋았던 방법은 TEM grid에 샘플을 로딩한 후에, SEM을 관찰하는 방법이었습니다.
말씀하신대로 동결건조를 시킨 후에는 구조가 제대로 유지되지 않을 우려가 있고, 다시 건조된 샘플을 카본테잎이나 기타 SEM용 substrate에 올릴 때에도 샘플 손상의 우려가 있습니다.
TEM용 grid 위에 liposome 샘플을 1, 2방울 dropping하신 후에 자연건조한 후 SEM 관찰을 해보시길 권해드립니다. -
답변
이인재님의 답변
2014-11-28- 1
TEM grid 에서 한번 해 봐야겠습니다. -
답변
한정현님의 답변
2014-12-09- 1
-스테이닝기법: 리포좀의 관찰을위해서는 가장 쉽게 사용하는 방법이 스테이닝 방법입니다. 예전 기억으로 텅스텐 계열의 시약을 사용하여 스테이닝하는 방법을 사용했던걸로 기억하는데, 표면전하가 뭐냐에 따라 사용하는 스테이닝 시약이 달라집니다. 제타포텐셜을 이용하여 표면전하가 뭔지 확인 후 POSITIVE 또는 NEGATIVE 스테이닝 시약을 선정하면 될 것 같네요.
- 리포좀 스테이닝 시약 검색하면 자료는 많이 나올 것 같고 전처리 방법 또한 검색하면 쉽게 나올 것 같습니다.
- 순서는 리포좀 용액을 정제 후 스테이닝용액 소량을 첨가하여 반응시킨 다음 TEM그리드에 샘플링 후 건조 시켜 전자현미경 관찰을 진행하면 리포좀의 형태 및 크기 등을 관찰 할 수 있습니다.
- 리포좀의 농도는 매우 희석하여 반응시켜야 형태관찰이 쉬우며 고농도로할 경우에는 관찰이 어렵습니다.
- 크라이오템(Cryo-TEM) : 크라이오템은 샘플을 동결시킨 다음 이를 절단(SLICING)하여 투과전자현미경으로 관찰하는 방법입니다. 6년전에 고려대학교에 의뢰하여 관찰했었는데 한번 알아보시고 아직도 가능하다면 담당자 분이 전처리 방법은 상세하게 알려줄 것 같네요.