2014-11-25
org.kosen.entty.User@7a2afad5
김주혁(kjh5703)
- 4
현재 cloning 중인데 질문이 있습니다.
예를 들어 Antibiotics marker가 있는 plasmid는 Antibiotics free 배지에서는
균주에 Transformation을 해도 금방 사라지는 걸로 알고 있어요...
불안정한 plasmid는 antibiotics free배지에서 1시간만에 사라지기도 하나요??
약한 plasmid는 최대 어느 정도 antibiotics free배지에서 버틸 수 있을까요??
일반적으로 금방 사라지는 plasmid기준으로 가르쳐 주신다면 감사하겠습니다.
예를 들어 Antibiotics marker가 있는 plasmid는 Antibiotics free 배지에서는
균주에 Transformation을 해도 금방 사라지는 걸로 알고 있어요...
불안정한 plasmid는 antibiotics free배지에서 1시간만에 사라지기도 하나요??
약한 plasmid는 최대 어느 정도 antibiotics free배지에서 버틸 수 있을까요??
일반적으로 금방 사라지는 plasmid기준으로 가르쳐 주신다면 감사하겠습니다.
- DNA cloning
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답변 4
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답변
김상태님의 답변
2014-11-27- 1
아마도 이것은 세포분열과정에 플라스미드의 항생제내성 유전자의 기피현상이거나 limiting dilution으로 복제하면서 카피수가 점점 감소하여 플스미드의 복제기능이 감소하므로 숙주의 분열 회수로
희석이 결국 유전자결실로 직결되었다고 보는 것이 가능 하지만 포유동물내 형질전환경우 episomal상태가 ㅇ아니고 염색체에 삽입된경우에는 이런 경우가 별로 없다. -
답변
염진기님의 답변
2014-11-27- 1
안녕하세요.
말씀하신대로 항생제가 없는 배지에서는 종종 plasmid 가 curing 되기도 합니다.
하지만 보통 5번 가량 항생제가 없는 배지로 계대를 했을때 대부분이 없어지구요 한시간 내에 없어지진 않습니다.
그나마 매우 sensitive한 temperature sensitive plasmid 도 보통은 10시간 이상 키워야지만
plasmid 가 사라집니다. 따라서 한시간 내에 plasmid 가 없어질 확률은 매우 낮습니다.
? -
답변
김상태님의 답변
2014-12-07- 1
일반적으,로 항생제 내성 PLASMID는 타입이 잇는데 벡터자체에 항생제 내성유전자가 없는경우도 ㅇ 있으나 질문에서 처럼 그런경우 우선 유전자의 염기성열을 확인바람
그다음 항생제 농도를 저농도에서 일정하게 지속적으로 처리하는 것 그다음 어느정도 고노옫에서 2-3개월정도 셋팅후에 발현되지 안는 경우는 거의 없음 -
답변
심우영님의 답변
2015-03-10- 1
아마도 cloninning을 하시는 모양인데 transfrmation 이후 안정화 부분에서 plasmid가 사라졌다고 판단하시는지요?그런 경우는 없습니다.오히려 완벽하게 transformation이 되지 않아 antibiotics plate로 옮겼을때 전멸하는 경우가 더 빈번합니다.
Antibiotics free 배지에서 overnight해도 완벽하게 사라지지 않습니다.