2015-01-05
org.kosen.entty.User@5ba68fac
김주혁(kjh5703)
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현재 BAC cloning에 대해 공부하고 있으며 human chromosome을 plasmid 형태로
cloning하는 계획을 갖고 있습니다. 그런데 replica라는 개념 자체가 이해가 안갑니다.
부끄럽지만 설명 혹은 설명이 있는 사이트를 알려주시면 감사하겠습니다.
cloning하는 계획을 갖고 있습니다. 그런데 replica라는 개념 자체가 이해가 안갑니다.
부끄럽지만 설명 혹은 설명이 있는 사이트를 알려주시면 감사하겠습니다.
- BAC cloning
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2015-02-04- 2
첨부파일
윗 분이 비교적 잘 설명을 해주셨네요.
플라스미드에 삽입된 유전체 (cDNA 혹은 genomic DNA 등) 단편을 bacteria에 도입하여 colony가 형성된 상태를 library라고 하고 각각의 colony를 따로 분리하여 384 well plate에 심어 놓은 것이 original plate죠. 이것을 직접 사용하면 원본이 없어질 수도 있으니 원본과 똑같은 replica plate를 384 well plate에 심어서 만든 것을 지칭하는 것 입니다. 예전에는 colony가 형성된 agar 배지 상에서 membrane 등을 이용해서 colony를 copy하는 방식을 주로 사용했었습니다. 교과서에도 그런 식을 그림으로 표현을 했었죠.^^
즉, 분자생물학에서 말하는 replica는 "복제품"으로 original은 아니지만, original과 동일한 유전자 단편을 가진 것으로 간주하시면 됩니다. -
답변
배소현님의 답변
2015-01-07- 1
안녕하세요?
저도 BAC cloning을 직접 해 본 사람은 아니지만, 첨부한 file (내용은 매우 단순합니다만...)을 보면, cloning을 해서 agar plate 상에 뜬 colony들을 384well plate에 suspension한 plate를 original plate라고 보고, 그 suspension된 clone들을 똑같이 생긴 새 384well plate에 같은 well에 같은 clone이 들어가도록 복제물을 만드는 것이라고 이해가 됩니다. 그러니까 같은 자리에 같은 clone이 들어간 384well plate를 두 개 만드는 것이지요. 이렇게 하면 plate 한 개는 assay에 사용하고 또 한 개는 보존에 사용한다든지 뭐 이런식으로 활용이 가능하고, 혹시나 원하는 clone을 발견했는데 보관중에 소실된다든가 하는 위험 부담을 줄일 수 있을 테니까요. 직접 해 보고 말씀드리는 게 아니라서 도움이 될런지 잘 모르겠습니다... -
답변
황규찬님의 답변
2015-08-21- 1
BAC library 혹은 YAC library 등은 내략 50kb-200kb의 크기의 genome library를 만들때 주로 사용하는 subclone 방법들입니다. 대략 사람인 경우 30억개의 염기로 되어 있기 때문에 10 copy를 coverage한다면 대략 하나의 clone이 150kb를 갖는다면 적어도 20만개의 BAC library가 필요합니다.
1) 향후 내가 원하는 유전자나 서열을 찾을때 dot hybridization 혹은 colony PCR를 통해 원하는 BAC clone를 찾고 분석에 활용합니다.
2) 이때 각각 subclone BAC library마다 번호가 부여되어 향후 여러 분석에 활용됩니다. 이때 이들을 원본 혹은 복제 clone개념으로 replica라고 하기도 합니다.