2015-01-08
org.kosen.entty.User@7b61bdfa
전병만(jbm8282)
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가장 기본적인 면이면서도 궁금한 것이 하나 있어 질문 드립니다.
1. tlc에 전개되지 않는 물질에는 어떤 것이 있고 그 이유는 무엇인지 궁금합니다.
2. 일반적으로 알고있는 solvent는 어떠한 이유때문에 tlc에 loading 용도로만 쓰이고 tlc에 남지 않는지 궁금합니다 (ex> 작용기? acid? 이유 때문인가)
3. trimetyl borate가 tlc에 전개되어도 보이지 않는다고 하는데 왜 그러한지 궁금합니다.
- tlc
- 전개
- trimetyl borate
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답변 3
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답변
이상후님의 답변
2015-01-09- 2
TLC에서 일반적으로 전개되지 않는 물질은 TLC에 사용된 고정상과 아주 강력한 결합을 하는 물질이거나 휘발성이 너무 강해 loading하자 마자 챔버내에서 바로 사라져버리는 물질이 되겠습니다. 그리고 TLC 용매와의 상호작용보다 고정상과의 상호작용이 더 커서 용매전개에 의해 이동하지 않는 경우가 있겠습니다. 보통 TLC 고정상은 일반 크로마토그래피처럼 역상과 순상으로 나눌 수 있는데, 역상은 C18이나 C8 또는 소수성 분자가 결합된 형태고, 순상의 대표적인 것은 실리카 또는 그 유도체가 사용되고 있습니다.
일반적으로 사용하는 용매는 극성도의 차이에 따라 혼합하여 사용하는데, 만약 극성도가 가장 높은 물이 사용되었더라도 전개후에 TLC plate 전개된 물질의 존재를 확인하기 위해서는 완전히 건조시킨 후에 확인해야 됩니다. 물이나 알콜 같은 경우는 -OH 같은 작용기가 있지만 크로마토그래피의 원리처럼 분석하고자 하는 물질이 이동상과 고정상과의 상호작용을 통해 물질이 분리되기 때문에, 용매의 작용기는 물질 분리에 기여하는 역활을 하게 됩니다. 그 외에 알콜류나 CHCl3나 CH2Cl2 같은 비극성도가 강한 용매는 휘발성이 강해서 전개후에 자연 건조시켜면 TLC plate에 남아 있지 않게 됩니다.
Trimethyl borate(TMB)는 물에 녹으면 분해가 되는 특성이 있습니다. 하지만 이것과는 무관하게 TLC 용매로 사용하게 되면 전개되었을 때는 용매 자체는 특징적으로 보이지 않습니다. 보통 물질 확인은 spraying reagent를 뿌리게 되면 물질중에 특정 작용기와 반응하여 UV나 visible light하에서 전개된 샘플이 보이거나 chromophore가 있는 물질은 reagent를 뿌리지 않고 UV나 illuminator하에서 보일 수 있습니다. 그런데 TMB는 UV나 가시광선 영역이나 흡수할 수 있는 chromophore가 없기 때문에 전개후에도 보이질 않습니다. 더구나 용매로 물을 함께 썻다면 용매 제조과정에서 분해가 되거나 전개과정중에 분해가 되기도 합니다.
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답변
윤웅찬님의 답변
2015-01-12- 1
전체적인 물음은 물질이 tlc상에서 분리되어 확인되는 것에 대한 것인 것 같습니다.
(1) Tlc 상에서의 전개는 tlc의 고정상을 이루는 물질의 종류와 물질을 전개하는 전개용매에 대한 분리 물질들의 상대 분배력에 대해 결정이 됩니다. 만약 tlc가 silca gel이라면 매우 강한 극성을 띤 물질 (carboxy acid, poly alcohol 등)은 고정상 silica gel과의 친화력이 강해 전개되지 않고 tlc 원점(origin)에 남아 관찰자에 의해 관찰되지 않는 것으로 생각되어지기도 합니다. 그러나 그 물질이 남지 않는 것은 아닙니다.
(2) Tlc loading 에 사용한 용매는 보통 증발하여 없어져 나타나지 않습니다. 만약 DMSO나 DMF등과 같은 bp가 매우 높은 용매를 사용하면 모두 증발하지 않고 tlc 상에 남아 있을 확률이 큽니다. 보통 유기화학 실험실에서 tlc 상의 물질 spot을 visualize하여 보는 방법이 UV lamp를 이용하여 보기 때문에 UV-Vis를 흡수할 수 있는 발색단 (chromophore)를 가지고 있지 않는 보통의 용매는 관찰되지 않아 존재하지 않는 것으로 생가될 수도 있습니다.
(3) Tlc 상에서 UV lamp로 물질 trimethyl borate spot를 관찰, 확인하고자 하면 보이지 않습니다. Trimethyl borate 또한 pi-conjugate 구조와 같은 발색단을 가지고 있지 않습니다. 따라서 UV-Vis 를 흡수하지 못하여 발광(luminescence; fluorescence와 phosphorescence)하거나 흡수한 빛을 소광(quenching)할 능력이 없기 때문에 보이지 않습니다. Tlc 고정상(silica gel)에는 형광을 내는 물질이 존재하여 UV lamp에 밝은 배경을 나타내지만 검출하고자 하는 물질이 UV-Vis을 흡수하지 못하면 보이지 않습니다. 검출 물질이 발색단을 가지고 있을 때에는 UV-Vis를 흡수하여 발광하면 그 발광색이 눈에 보여 존재가 확인이 됩니다. 소광을 하면 검게 보입니다. 발광하는 빛은 파장이 가시광역의 파장을 가져 인간의 눈에 보이게 됩니다. -
답변
김동현님의 답변
2015-01-15- 1
1. 앞서 답변 하신 분들께서 이미 언급하셨듯이 TLC는 물질의 극성과 고정상의 극성에 따라 물질의 전개양상이 달라집니다. silica gel 기반의 TLC를 사용하는 경우 물질이 굉장히 극성을 띄고 있으면 고정상과 큰 상호작용을 하고 이 상호작용을 끊을 수 있는 극성이 높은 이동상을 사용해야합니다. 만약 이동상의 극성이 충분치 않으면 물질은 전개되지 않습니다. 역상 TLC의 경우는 그 반대로 생각하시면 됩니다. 또한 휘발성이 강한 물질의 경우는 전개되기전 휘발하여 관측이 되지 않을 수 있습니다.
tlc에 관하여 정확하게 이해가 되었습니다. 감사합니다^^