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안녕하세요. HUMAN PRP를 가지고 실험 준비중인 학생입니다.
논문을 찾아보니 PRP 분리방법이 그리 어렵지 않아서 그대로 진행해 보니 저는 PRP가 전혀 분리가 되지 않아 보입니다.
보통 5600RPM 에서 6min 아니면 1200rpm에서 15min 이고 그 외에 여러 조건들이 있지만 전반적으로는 저런 방법대로 whole blood를 바로 cfg하면 총 3개의 층이 생기고 가장 위의 층이 PPP / 가운데 층이 PRP / 가장 아래 층이 RBC라고 되어있었습니다.
그래서 저도 제 피 10ML을 뽑아서 실험을 진행해 보니 그냥 일반적으로 blood 를 cfg하면 나뉘어 지는 것처럼 RBC와 PLASMA만 분리가 되네요. [PRP와 PPP 등의 층은 보이지 않았습니다.]
5600rpm에서 6min / 1200rpm에서 15min / 2400rpm에서 10min 돌리고 다시 plasma를 옮긴 후 옮긴 plasma를 다시 3000rpm에서 5min 이렇게 전부 진행해 보았는데 PRP 가 분리가 되지 않았습니다.
혹시 제가 무언가를 실수하는 부분이 있을까요?
한가지 걸리는게 모든 논문들에서 blood의 항응고를 위해 sodium citrate 등의 항응고제를 사용했다고 나오는데 저희 실험실에는 heparin이 전처리 되어있는 tube가 있기 때문에 따로 시약을 처리하지는 않았습니다. 이 부분이 문제가 되었을까요?
PRP를 가지고 실험을 해 보신 분들이 계시면 조언을 부탁드리겠습니다.
- prp
- platelet
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
전강진님의 답변
2015-02-04- 1
첨부파일
저는 1800g (3000)rpm 6~10분으로 보통 하는데 원심분리 후에 RBC층과 혈장사이에 buffy coat라고 하얀막같이 생기지 않나요??
전강진(jkjwrw) 2015-02-04혈액일 경우 불투면한 경우는 없었습니다. 저도 헤파린을 사용하였구요
골수의 경우 지방이 조금 끼는데 지방도 혈장 위로 떠서 buffy coat는 잘 관찰됩니다.
혹시 추출한 후 시간이 지난것인지??
혈액보관은 어떻게 하신건지요??
clot이 생겨 지저분해진거라면 헤파린 코팅튜브 외에 헤파린을 조금 더 첨가하여 clot이 생기지 않은 상태에서 원심분리 하시면 좋을 것 같습니다. -
답변
장성재님의 답변
2015-02-04- 1
비교적 최근에 publish된 PRP, PPP 분리법 관련 논문을 첨부합니다.
참고하세요.
그리고, sodium citrate 채혈 튜브를 사용하실 것을 권장드립니다.
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답변
Kim Beom Su님의 답변
2015-02-04- 1
rpm 값은 원심분리기에 따라 차이가 있습니다.
g 값으로 실험해보세요
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답변
김상태님의 답변
2015-02-05- 1
sodium citrate나 edta 을 사용해야지 헤파린을 사용하면 분리가 쉽지 않습니다
아~ 답변 감사드립니다. 한가지만 여쭤 보겠습니다. 혹시 혈액이 좀 지저분해서 그러한 층이 보이지 않을 수도 있나요? 보통 plasma를 분리할 겨우 맑은 노란 빛이면서 확실히 투명한데 혈액 지질 등의 지방이 많을 경우 plasma가 불투명하게 뿌옇게 분리가 되는데 이러한 현상때문에 층이 구분이 안될때도 있나요?