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답변 1
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답변
김도연님의 답변
2015-04-17- 2
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먼저, 저는 말씀하신 kit을 사용해본 적이 없고 제가 속한 실험실에서는 classical한 방법으로 assay를 합니다만 조금이라도 도움이 되실까 해서 적어봅니다.
혼합 용액 1ml에 BSA (1mg/ml)짜리를 1ul, 2ul, 4ul, 8ul, 16ul 넣었다면 이것은
-> 각각 1ug/ul, 2ug/ul, 4ug/ul, 8ug/ul, 16ug/ul로 standard가 잡힌 것이지요?
1ml의 용액에 16ul면 그렇게 많은 부분을 차지하는 부피는 아니지만...
그래도 넣는 BSA volume은 동일할수록 좋습니다.
예를 들면 1ul의 BSA를 넣으신 곳에 15ul의 용매(BSA를 녹인)를 첨가해주시는 게 좋을 것 같습니다.
농도는 전체 solution으로 보면 1ug/ml, 2ug/ml, 4ug/ml, 8ug/ml, 16ug/ml이 될 것이고, bradford 용액을 제외하고 생각해보면 1ug/ul, 2ug/ul, 4ug/ul, 8ug/ul, 16ug/ul이 되겠지요.
또한 단백질 농도가 너무 안나와서 혼합 용액 1ml에 sample 의 일부 100ul 를 넣었습니다.
-> datasheet에 보면 Add 1ml of diluted PRO-MEASURE solution 이라고 되어있어서
900ml+ 100ul 하지 않고 1ml+ 100ul 를 하였는데 괜찮은것인가요?
100ul는 꽤 많은 부피인 것 같습니다. 900ul+ 100ul로 하심이 더 맞을 것 같구요..부피도 문제이지만 100ul가 들어가면서 sample의 버퍼도 assay 결과에 영향을 미칠 것 같네요. 한번 sample의 buffer만 100ul을 넣고 assay를 해보시면 어떨지요?
그리고 반응 후 595 nm 에서 측정하였습니다.
그래프 그리고 r2 값확인하였고 식에 대입하여 만약 5가 나왔다면, 이 sample의 농도는
-> 5ug/100ul이며 이것을 ml 단위로 바꾸면 total 50ug/ml 이 되는것이 맞나요?
계산상으로는 맞는 것 같은데, 이 결과보다...먼저 위에 제가 적은 것들을 한 번 확인해보셨으면 합니다.