2015-07-13
org.kosen.entty.User@69eb6186
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Real time-PCR로 샘플 안에 들어있는 미생물 군 정량분석이 가능한지요?!
유산균, 대장균군, 비피더스균, 총균수 등 카테고리 별로 정량분석을 하고싶습니다.
그리고 혹시 Real time-PCR을 분석해주는 기관이나 연구소를 아시면!! 답변해주세요!! 기계가 없어서 의뢰를 하려고 합니다~~ ! 국가인증기관이 아니어도 괜찮습니다.
답변에 미리 감사합니다.
- RT-PCR
- 정량분석
- 분석기관
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
이상후님의 답변
2015-07-14- 2
단계적으로 희석한 standard 샘플을 이용해서 real-time PCR을 실시하면 초기 DNA 양이 많은 차례로 일정한 간격으로 나란한 증폭 곡선이 만들어지게 되는데, 여기서 적당한 적당한 곳에 반응을 일으키는 최소의 역가("threshold")를 설정하면, 반응을 일으키는 최소의 역가와 증폭 곡선이 만나는 점인 "Ct(threshold cycle) 값이 산출됩니다. 다시말해, Ct값은 PCR 증폭 산물이 일정량 증폭되었을 때의 cycle 수를 말합니다.
참고로, real-time PCR은 일반 컨벤셔널 PCR에 비해 그다지 범용적(공용장비로서)으로 구비하여 사용하고 있는 장비는 아닌듯 합니다. 분석대행을 해주는 정부출연기관중에는 기초과학지원연구원 광주분원을 추천하고자 하나, 서울 경기, 충청권에 계실 경우, 정부투자 연구비로 조성된 분석기기중에 공용 사용이 가능한 기관을 조회할 수 있는 시스템(일명, "ZEUS")상에서 조회하여 사용가능한 기관을 찾을 수 있습니다. 아래 웹사이트 참고바랍니다.
http://www.zeus.go.kr -
답변
김덕중님의 답변
2015-07-14- 1
RT PCR에서 정량 가능하구요.
대부분 학교에서 보유하고 있습니다.
물론 국책연구기관이나 일반회사중 진단키트나 백신관련회사등의 바이오회사는 보유하고 있습니다.
정인애(gerrardinae1) 2015-07-14예 감사합니다. 혹시 정량분석 시 절대적인 양을 나타낼 수도 있나요? 그 단위가 cfu인지.. od값인지.. 어떤건지 궁금합니다!
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답변
장성재님의 답변
2015-07-15- 1
선생님께서는 식품 내 미생물을 군집별로 정량적으로 분석하고 싶은 것 같으신데, real-time PCR 장비가 있으시면 TAKARA Bio.의 키트를 사용하여 전체 미생물의 수 (54종, 첨부 파일 참조)는 정량적으로 분석이 가능합니다만, 카테고리별로 정량을 하시려면 각각의 균종에 따른 specific primer를 디자인하셔서 연구를 진행하셔야 할 것 같습니다.
관련 논문도 첨부합니다. 참고하세요.
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답변
황규찬님의 답변
2015-07-29- 1
윗분들이 좋은 답변을 해 주셨는데 첨가하여 몇자 적습니다.
1) 외부에 의뢰하기 위해서는 문헌서치를 통해서 혹은 각각의 미생물 지놈서열 분석을 통해 미생물 특이 프라이머를 디자인하셔야 외부에 의뢰하신다해도 효율적으로 연구가 진행 될 수 있습니다.
2) 단순히 미생물의 유무를 알기위한 상대적인 정량이 아닌 절대적인 정량을 위해서는 standard donor DNA(vector)가 필요합니다.
3) Real-time machine은 분자생물학을 하는 곳이라면 필수적인 장비이기 때문에 어렵지 않게 의뢰하거나 사용이 가능합니다(대학, 연구소 등등).
4) 또한, 정확한 정량을 위해서는 negative, positive sample이 반드시 필요하므로 참고하시기 바랍니다.
감사합니다. 좋은 기관을 만나 덕분에 도움 많이 받았습니다