2016-01-24
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이진욱(jinoogi87)
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안녕하세요
PBMC 가 자꾸 aggregation 되서 손실률이 너무 많습니다.
PBMC stock을 바로 thawing 하고 mitomycin c를 바로 처리합니다.
PBMC에 mitomycin c 처리할때 15ml tube에 media volume 2ml에 mitomycin c 25ug/ml 농도로
처리해서 37도 incubation 에서 30min 처리 합니다. (mitomycin c abcam제품)
centrifuge를 하면 pellet 전체가 뭉쳐서 떨어지지 않습니다.
대략 cell 수를 15 x 10^6 을 넣고 mitomycin c 처리후 cell counting을 하면
대략 1~2 x 10^6 나오거나 많이 나올때는 2~3 x 10^6 나옵니다.
혹시 tube에 해서 aggregation 많이 되나요?? flask나 dish에서 처리를 해야 되나요??
꼭 pbmc가 아니더라도 다른 cell을 어떻게 처리하시는지 알려주세요!!
- PBMC
- Mitomycin
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
김상태님의 답변
2016-01-25- 2
세포를 배양한 배양접시에 먼저 mito-C를 처리후 세척한다음 트립신을 처리하거나 harvest후 코니카 튜브에 넣고 원심후 상등액을 제거한 다음 pbs로 1000p로 파이펫팅후 잘 분리한 다음 체크하세요 -
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김동수님의 답변
2016-01-25- 1
네, 세포배양으로 고생하시는 군요. 뱅킹에서 plate에 쏘잉해보시면 훨 나을겁니다. 작업프로세스의 문제죠. 도움되셨기를 바랍니다.
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신소연님의 답변
2016-01-25- 1
~동일한 condition이나 실험을 한게 아니라 딱 찝어서 comment 해드리기가 어려우네요.
falcon tube로 하구요 보통 그렇게 달라붙는 경우는 잘 없어요.
media condition이나 cell purity 확인 한번 해보시는게 어떨까싶어요. -
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김병모님의 답변
2016-02-03- 1
제가 아는 범위에서 답변드립니다.시험물질을 바로 처리하지 말고, PHA를 넣어주어 24시간 전배양 한 다음 시험물질 처리하는 것을 권장하고 싶습니다.아무래도 생체내 있을때보다 환경이 좋지 않아 세포가 aggregation 되는 것은 어쩔 수 없을 것으로 생각되나 전배양을 통해 어느정도 환경에 적응시켜 안정화 시킨다음 시험물질 처리하는 것을 권장하고 싶습니다.또한 thawing 하는 세포양이 너무 많지 않은가 생각됩니다. volume이 얼마나 되는지는 모르나 15 x 10^6 는 너무 많다고 생각됩니다.