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지식나눔

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세포 배양시 HEPES의 농도

2016-03-18 org.kosen.entty.User@67b75008 허강(kangh9012)
  • 5
안녕하세요. 배지에 관련해서 질문드립니다.
세포배양시 왜 HEPES의 농도를 10-25mM을 넣어야 하죠?? 
  • HEPES
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변! 
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답변 5
  • 답변

    이배훈님의 답변

    2016-03-19
    • 2
    보통의 배양액은 bicarbonate buffer 시스템으로 CO2 하에서  세포배양에 적합한 pH를 유지해 줍니다.
    하지만 세포 배양 중 관찰 및 세포 처리로 인큐베이터 밖에서 잠깐 놓이게 되는데 이때 pH를 유지 못해 세포에 손상을 줍니다. 이것을 방지 하기 위해 HEPES를 넣어 주는데 HEPES는 CO2와 무관하게 pH를 유지해 줍니다. 다만 10 mM이상에서 pH 유지가 효과적이며 25  mM이상에서는 세포독성이 있어 이범위에서 사용됩니다.
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    보통의 배양액은 bicarbonate buffer 시스템으로 CO2 하에서  세포배양에 적합한 pH를 유지해 줍니다.
    하지만 세포 배양 중 관찰 및 세포 처리로 인큐베이터 밖에서 잠깐 놓이게 되는데 이때 pH를 유지 못해 세포에 손상을 줍니다. 이것을 방지 하기 위해 HEPES를 넣어 주는데 HEPES는 CO2와 무관하게 pH를 유지해 줍니다. 다만 10 mM이상에서 pH 유지가 효과적이며 25  mM이상에서는 세포독성이 있어 이범위에서 사용됩니다.
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  • 답변

    장성재님의 답변

    2016-03-21
    • 2
    HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulphonic acid) provides an alternative to the use of bicarbonate for buffering because it does not require elevated levels of CO2.  Unlike the low pKa of bicarbonate, HEPES has a pKa of 7.66 making it a much stronger buffer in the pH 7.2-7.6 range than bicarbonate buffer.  Potential disadvantages of HEPES include toxicity over 100 mM and lack of nutritive value to the cell.  The recommended working concentration is 10-25 mM.

    참고 웹사이트:     http://cellgro.com/hepes-liquid.html
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    HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulphonic acid) provides an alternative to the use of bicarbonate for buffering because it does not require elevated levels of CO2.  Unlike the low pKa of bicarbonate, HEPES has a pKa of 7.66 making it a much stronger buffer in the pH 7.2-7.6 range than bicarbonate buffer.  Potential disadvantages of HEPES include toxicity over 100 mM and lack of nutritive value to the cell.  The recommended working concentration is 10-25 mM.

    참고 웹사이트:     http://cellgro.com/hepes-liquid.html
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  • 답변

    허강님의 답변

    2016-03-19
    • 1
    혹시 10mM이상일때 버퍼유지에 효과적인것에 대한 근거는 henderson-hasselbalch eqution으로 돌출 된 것인가요?
    답변수정
    혹시 10mM이상일때 버퍼유지에 효과적인것에 대한 근거는 henderson-hasselbalch eqution으로 돌출 된 것인가요?
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  • 답변

    최수미님의 답변

    2016-04-26
    • 1
    배양하는 세포마다 적합한 buffer가 다릅니다. 
    단적인 예로 primary or differentiated hepatocyte의 경우 Hepes 첨가유무는 아주 중요합니다. 
    그렇지 않은 보통의 cell line의 경우에는 다른 compound로 대체가 가능합니다...
    Hepes가 상대적으로 비싸지요...
     
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    배양하는 세포마다 적합한 buffer가 다릅니다. 
    단적인 예로 primary or differentiated hepatocyte의 경우 Hepes 첨가유무는 아주 중요합니다. 
    그렇지 않은 보통의 cell line의 경우에는 다른 compound로 대체가 가능합니다...
    Hepes가 상대적으로 비싸지요...
     
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  • 답변

    김동현님의 답변

    2016-05-16
    • 1
    아래 논문도 한번 참고해보세요.

    Baicu SC, Taylor MJ. (2002). "Acid-base buffering in organ preservation solutions as a function of temperature: new parameters for comparing buffer capacity and efficiency". Cryobiology 45 (1): 33–48.
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    아래 논문도 한번 참고해보세요.

    Baicu SC, Taylor MJ. (2002). "Acid-base buffering in organ preservation solutions as a function of temperature: new parameters for comparing buffer capacity and efficiency". Cryobiology 45 (1): 33–48.
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