2016-05-23
org.kosen.entty.User@46f98961
김병수(kim1000j)
- 3
안녕하세요.
HPLC 분석에 관련하여 질문 드립니다.
EP를 보고 분석을 하고 있습니다. 그런데 base line이 자글자글 합니다.
Base line개선하는 방법이 궁금 합니다.
지금 조건은 TFA 5ml, H2O800ml, ACN 200ml에 컬럼온도 50~55, 유속 0.7~1.2ml/min
입니다. 기존 조건은 TFA 0.5ml 들어가는 조건이었는데요
Symmetry factor 값이 맞지 않아서 바꿨거든요.
TFA 비율이 증가하면 Factor값이 개선이 되더라구요.
기존에도 Base line이 그리 좋지 않았지만 혹시 TFA 비율이 10배 증가하여 그런것인가요?
사용중인 컬럼은 Xbridge 18C, 3.5um 입니다. pH 범위는 1~12 입니다.
base line개선할수 있는 방법좀 알려주세요.
세척이라던지 구체적으로 말씀좀 해주세요.
HPLC 분석에 관련하여 질문 드립니다.
EP를 보고 분석을 하고 있습니다. 그런데 base line이 자글자글 합니다.
Base line개선하는 방법이 궁금 합니다.
지금 조건은 TFA 5ml, H2O800ml, ACN 200ml에 컬럼온도 50~55, 유속 0.7~1.2ml/min
입니다. 기존 조건은 TFA 0.5ml 들어가는 조건이었는데요
Symmetry factor 값이 맞지 않아서 바꿨거든요.
TFA 비율이 증가하면 Factor값이 개선이 되더라구요.
기존에도 Base line이 그리 좋지 않았지만 혹시 TFA 비율이 10배 증가하여 그런것인가요?
사용중인 컬럼은 Xbridge 18C, 3.5um 입니다. pH 범위는 1~12 입니다.
base line개선할수 있는 방법좀 알려주세요.
세척이라던지 구체적으로 말씀좀 해주세요.
- HPLC
- 분석
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
이상후님의 답변
2016-05-24- 3
경험적으로, 사용하는 용매(이동상 포함)를 0.2 um membrane filter로 여과를 철저하게 하면 baseline이 어느 정도는 좋아질 것으로 보입니다. 또한 모든 용매가 HPLC grade인지도 확인이 필요할 듯 합니다. 또한 pH가 일정하게 맞춰지지 않았을 경우에도 baseline이 안좋을 수 있구요. Detector부분에 contamination이 되어도 그런 경우가 생길수 있습니다.
TFA는 보통 peak shape를 좋게 하기 위해(보통 대칭적인 peak shape 얻기 위해) 사용하는데, 분석물질과 사용 컬럼에 따라 사용 또는 사용하지 않을 수도 있습니다. 조심해야 될 부분은 산에 불안정한 HPLC 컬럼의 경우는 TFA 비율을 높일 경우 일시적으로 peak shape은 좋아질 수 있으나 컬럼 수명이 짧아진다는 단점이 있습니다. -
답변
조윤환님의 답변
2016-05-23- 2
반갑습니다.
베이스라인 문제의 원인은 여러가지가 있습니다.
TFA 유무에 따라 베이스라인에 문제가 생긴다면 TFA가 문제 입니다.
TFA의 양을 마음데로 늘리시면 않됩니다. 약전 분석법은 각 파라미터를 조종할 수 있는 범위가 정해져 있습니다. 나중에 분석결과를 인정받지 못할 수 있습니다.
이동상을 만들 때 사용한 시약들이 문제일 수도 있고, 컬럼도 가능성이 있습니다.
검출기의 램프 수명이 다된 경우에도 비슷한 현상이 나타날 수 있습니다.
천천히 하나씩 확인하시길....
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답변
신소림님의 답변
2016-06-07- 1
컬럼을 연결하지 않았을 때에도 베이스라인에 노이즈가 보인다면 디텍터의 문제일 수 있습니다.
컬럼을 연결했을 때에만 보인다면 컬럼 또는 이동상의 문제일 수 있는데요,
다른 이동상을 흘렸을 때에는 베이스라인이 정상인지 확인해보셔야 할 것 같습니다.
참고로 TFA는 매우 강산입니다.
임의로 이동상의 TFA를 조정하셨다면 pH를 확인하신 후 사용하시는 것이 좋습니다.
컬럼이 pH 1까지 견딘다고는 하지만 이동상을 강산으로 쓰는 경우에는
컬럼 관리를 더 신중하게 해야 하므로 주의가 필요합니다.
그리고 어떤 실험인지는 모르지만, EP의 경우 실험법이 공정서에 정해져 있습니다.
공정서의 방법대로 하시는 것을 추천해드립니다.
제 경험상 EP는 컬럼이 안정화가 잘 되어있을 때 깔끔하게 분석되고
컬럼의 상태가 좋지 않으면 피크도 지저분하게 잡히고 분리능이 떨어졌던 것으로 기억합니다.
컬럼의 세척상태와 분석 전 안정화 과정 다시 점검해보시는 것도 추천해드립니다.