2016-05-31
org.kosen.entty.User@3bffd0e4
장미옥(bestwife76)
- 1
식물 세포 배양을 통해 2차 대사산물 생산수율을 높이고자 합니다
효소 활성을 높임으로써 타겟 물질 생산 수율을 높이려는 시도를 하고 있는데요..
확인해보니 이 효소는 Mg2+ 를 cofactor로 사용하고 이 이온을 첨가했을 때 효소 활성이 높아진다고 되어 있었습니다
그런데, 식물 세포 배양 배지에는 기본적으로 Mg2+이 macromolecule로 포함되어 있습니다
물론, 포함된 농도는 세포가 생존하기 위한 농도이지요
그렇다면, 여기서 질문이요..
효소 활성을 위해 cofactor의 영향은 얼마나 되는지 궁금합니다
1. 세포 생존 목적이 아닌 효소 활성 목적으로 별도로 cofactor인 Mg2+을 첨가해 주지 않으면 효소 활성이 높아지지 않는지요?(효소 활성이 높다는 것은 결국은 타겟 물질 생산을 많이 하는 것으로 확인이 가능할 것 같습니다)
2. 첨가를 해야 한다면 어느 농도로 첨가를 해야 할까요?
물론 실험적으로 증명하는 것이 가장 좋긴 하지만
유사한 실험들을 참고 한다면 농도 범위를 줄일 수 있어서 실험 횟수가 줄 수도 있어서요
in vitro 실험에서는
이 효소 + buffer + cofactor 10mM(MgCl2)를 사용했습니다
효소 활성을 높임으로써 타겟 물질 생산 수율을 높이려는 시도를 하고 있는데요..
확인해보니 이 효소는 Mg2+ 를 cofactor로 사용하고 이 이온을 첨가했을 때 효소 활성이 높아진다고 되어 있었습니다
그런데, 식물 세포 배양 배지에는 기본적으로 Mg2+이 macromolecule로 포함되어 있습니다
물론, 포함된 농도는 세포가 생존하기 위한 농도이지요
그렇다면, 여기서 질문이요..
효소 활성을 위해 cofactor의 영향은 얼마나 되는지 궁금합니다
1. 세포 생존 목적이 아닌 효소 활성 목적으로 별도로 cofactor인 Mg2+을 첨가해 주지 않으면 효소 활성이 높아지지 않는지요?(효소 활성이 높다는 것은 결국은 타겟 물질 생산을 많이 하는 것으로 확인이 가능할 것 같습니다)
2. 첨가를 해야 한다면 어느 농도로 첨가를 해야 할까요?
물론 실험적으로 증명하는 것이 가장 좋긴 하지만
유사한 실험들을 참고 한다면 농도 범위를 줄일 수 있어서 실험 횟수가 줄 수도 있어서요
in vitro 실험에서는
이 효소 + buffer + cofactor 10mM(MgCl2)를 사용했습니다
- 효소 활성화
- cofactor
- magnesium ion
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이상후님의 답변
2016-05-31- 2
효소 활성을 위해서 cofactor는 반드시 있어야 합니다. Cofactor의 역활은 말 그대로 단백질 효소가 촉매적 활성을 보이기 위해 보조인자로 꼭 필요한 물질입니다. 쉽게 말하면 어떤 단백질 효소만 있을 때는 반응속도가 0.5 uM/min 의 속도로 product를 만든다면, cofactor가 있을 경우엔
>50 uM/min 의 product 생성 속도를 보인다고 볼 수 있습니다. 경우에 따라서는 cofactor가 없을 때에는 효소적 반응이 진행되지 않는 경우도 있습니다. 또한 어떤 효소(예, pyruvate dehydrogenase)의 경우는 몇 가지 cofactor를 모두 필요로 하는데, 유기물 cofactor들과 Mg2+같은 무기질 cofactor 모두 필요로 합니다.
첨가량은 이미 알려진 refer를 참고하시는 것이 제일 좋은 방법이며, 만약 새롭게 발견한 효소라면 가능성 있는 cofactor 후보군들에 대해서 최적의 농도를 찾아야 합니다. 대부분 cofactor 농도는 trace 농도 수준 아니면 이 보다 조금 더 높은 농도로 사용하고 있습니다. 그런데 이미 배양 배지에 Mg2+가 일정농도 이상으로 첨가되어 있다면 따로 넣어줄 필요는 없을 거 같습니다. 다만 Mg2+외에 다른 cofactor가 또 필요한지에 대해서는 확인이 필요합니다.
감사합니다
실험 계획 수립에 아주 아주 큰 도움이 되었습니다
감사합니다