2016-07-07
org.kosen.entty.User@374d7c7a
이윤재(lyj2619)
- 3
논문을 읽는 중에 MRP1,2,3,4실험을 진행하는 방법을 보다 보니
MRP1,2,3는 stable transfected expressing을 사용하였고 MRP4는 traniently expressing를 통해 하엿던데 이 두가지의 차이와 같은 실험에서 왜 다른 방법을 사용하였는지 알고 싶습니다.
MRP1,2,3는 stable transfected expressing을 사용하였고 MRP4는 traniently expressing를 통해 하엿던데 이 두가지의 차이와 같은 실험에서 왜 다른 방법을 사용하였는지 알고 싶습니다.
- transfect
- MRPs
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 3
-
답변
장성재님의 답변
2016-07-08- 2
위에 언급하신 유전자들을 세포에 도입하여 발현을 유도하는 것과 관련된 질문을 하셨네요.
일반적으로 gene transfection은 바이러스 벡터를 이용하거나 플라스미드 상태의 유전자를 양이온성 리포좀 등을 이용하여 유전자를 표적 세포에 전달시키며, 표적 세포의 염색체로 원하는 유전자를 삽입시키거나 (stable transfection) 또는 염색체 이외의 상태로 발현을 시키는 (transient transfection) 방법을 사용합니다. 사용하는 세포주 (표적 세포) 또는 사용 목적에 따라서 다양한 transfection system이 있으므로 구별하여 사용하는 것이 좋습니다.
예로써 retrovirus (또는 lentivrus)를 이용하는 경우 표적 세포의 염색체에 삽입하여 stable transfection을 유도합니다. -
답변
이승준님의 답변
2016-07-08- 1
윗 분이 잘 설명해주신 것과 대동소이합니다만,
간단히 설명하면 stably tranfected expression은 stable expression 다시말해 stable cell line을 사용했다고 생각하시면 될 것 같습니다.
특정 gene을 overexpression 하거나, depletion을 위해 shRNA, microRNA targeted oligo nucelotide를 cell에 stably introduction하려면
1. 여러 효율적 방법(liposome-based transfection, virus system 등)으로 cell 에 tranfection 하고
2. gene 또는 이 oligonucleotide가 chromosome에 잘 integration된 cell을 selection
예를 들면, introduction vector내 antibiotics system을 이용하여 serial하게 dilution된 배지로 계속 배양하면서 antibiotics-resistant cell = gene introduced cell로 스크리닝
3. stable cell line 확립
반면에 transient expression은 transfection reagent 등을 활용하여 일시적으로 특정 gene이나 shRNA, microRNA등을 cell내에서 발현되도록 하지만, genome상에 integration 되지는 않습니다. cell division과 여러다른 요인들에 의해 compensation되어 이 효과들이 사라지기 때문입니다.
구글링해서 아주 간단한 그림을 찾았네요 ^^
도움이 되셨으면 합니다.
-
답변
김동수님의 답변
2016-07-11- 1
외래유전자 발현이 두가지 방법에 의해 세포내에서 유도될 수 있음은 잘 아는 내용이 되는데요, 우리는 이들을 특정목적에 알맞게 적용하는 것이 방법론만큼이나 중요할것입니다. 특히 stable transfection에 의한 변이체들이 환경에 미칠 잠재적 영향 등은 매우 중요한 부분이므로 연구자들은 재조합유전체 와 그 산물을 잘 관리해야 할 의무가 발생하게 됩니다.