지식나눔

HPLC-MSMS 분석 위한 샘플준비

약물 처리 후 세포 내에 cGAMP의 양을 측정하고 자 합니다.
이때 세포를 lysis 해야 하는데요, 보통은 어떤 방법들을 쓰시나요?
세포는 adhesive cell 이구요.
테크니션은 샘플 준비 후  5 Vol methanol로 precipitation 하라고 하는데, sample lysis 방법에 대해서는 잘 모르겠다고 하네요.

보통 Western blot 할 때 처럼 lysis 해도 되는지, 아니면 다른 방법으로 lysis 한 후  precipitation을 해야 하는지 알고 싶습니다.  
  • HPLC-MSMS
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답변 1
  • 답변

    이상후님의 답변

    기본적으로 cell lysis는 buffer 또는 계면활성제로도 가능합니다. cGAMP는 분자량이 674 정도이므로 일반 단백질 정제를 위한 cell lysis buffer외에도 methanol이나 ethanol 같은 알콜계 계면활성제 또는 1% Triton X-100 같은 흔한 계면활성제로도 lysis가 가능합니다. 만약 5 vol. methanol을 처리하게 되면 세포막 파괴 뿐만 아니라 세포내에 고분자량 단백질이나 다당류 등을 침전시키기 위함인거 같습니다. 어떤 방법을 쓰느냐는 HPLC-MS/MS로 검출전에 전처리 과정에서 불순물을 얼마나 잘 제거하느냐가 중요하기 때문에, 기존 문헌을 참고해서 몇 가지 테스트를 거쳐서 최적화를 하는 것이 바람직해 보입니다.
    기본적으로 cell lysis는 buffer 또는 계면활성제로도 가능합니다. cGAMP는 분자량이 674 정도이므로 일반 단백질 정제를 위한 cell lysis buffer외에도 methanol이나 ethanol 같은 알콜계 계면활성제 또는 1% Triton X-100 같은 흔한 계면활성제로도 lysis가 가능합니다. 만약 5 vol. methanol을 처리하게 되면 세포막 파괴 뿐만 아니라 세포내에 고분자량 단백질이나 다당류 등을 침전시키기 위함인거 같습니다. 어떤 방법을 쓰느냐는 HPLC-MS/MS로 검출전에 전처리 과정에서 불순물을 얼마나 잘 제거하느냐가 중요하기 때문에, 기존 문헌을 참고해서 몇 가지 테스트를 거쳐서 최적화를 하는 것이 바람직해 보입니다.
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