2016-08-24
org.kosen.entty.User@685e5969
임승애(dotoro2327)
- 1
약물 처리 후 세포 내에 cGAMP의 양을 측정하고 자 합니다.
이때 세포를 lysis 해야 하는데요, 보통은 어떤 방법들을 쓰시나요?
세포는 adhesive cell 이구요.
테크니션은 샘플 준비 후 5 Vol methanol로 precipitation 하라고 하는데, sample lysis 방법에 대해서는 잘 모르겠다고 하네요.
보통 Western blot 할 때 처럼 lysis 해도 되는지, 아니면 다른 방법으로 lysis 한 후 precipitation을 해야 하는지 알고 싶습니다.
이때 세포를 lysis 해야 하는데요, 보통은 어떤 방법들을 쓰시나요?
세포는 adhesive cell 이구요.
테크니션은 샘플 준비 후 5 Vol methanol로 precipitation 하라고 하는데, sample lysis 방법에 대해서는 잘 모르겠다고 하네요.
보통 Western blot 할 때 처럼 lysis 해도 되는지, 아니면 다른 방법으로 lysis 한 후 precipitation을 해야 하는지 알고 싶습니다.
- HPLC-MSMS
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
-
답변
이상후님의 답변
2016-08-26- 1
기본적으로 cell lysis는 buffer 또는 계면활성제로도 가능합니다. cGAMP는 분자량이 674 정도이므로 일반 단백질 정제를 위한 cell lysis buffer외에도 methanol이나 ethanol 같은 알콜계 계면활성제 또는 1% Triton X-100 같은 흔한 계면활성제로도 lysis가 가능합니다. 만약 5 vol. methanol을 처리하게 되면 세포막 파괴 뿐만 아니라 세포내에 고분자량 단백질이나 다당류 등을 침전시키기 위함인거 같습니다. 어떤 방법을 쓰느냐는 HPLC-MS/MS로 검출전에 전처리 과정에서 불순물을 얼마나 잘 제거하느냐가 중요하기 때문에, 기존 문헌을 참고해서 몇 가지 테스트를 거쳐서 최적화를 하는 것이 바람직해 보입니다.