2016-08-31
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김재용(jykim761217)
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안녕하세요! 현재 항염증 실험을 진행하고 있습니다. NO, iNOS, PGE2, 염증 cytokine 같은 염증인자들이 억제되는 것을 확인 하였습니다. 그런데 COX-2 단백질 발현을 Western blot으로 확인 하였을때 COX-2 단백질 level이 감소하지 않았습니다. Kit를 이용해 COX-2 enzyme inhibitor을 확인 하였을때 감소되는 것을 확인하였습니다. 왜 이렇게 되는지 궁금합니다.
- 항염증
- COX-2
- 천연물
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답변 5
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답변
이상열님의 답변
2016-09-02- 2
실험하시는 분이 제일 잘 아시리라 생각되어집니다만 제 생각에는 iNOS, NO, PGE2에 대한 것보다 여기서 핵심은 COX2 enzyme inhibitor일 가능성이 높습니다. COX2 enzyme inhibitor가 작동할 수 없는 환경 혹은 COX2 enzyme inhibitor에 대한 경쟁적인 인자 존재 등등을 생각해보시면 되실 것 같습니다. COX2가 잡힌다는 의미는 inflammation이 진행되고 있다는 의미로 보이면 그렇다고 악화되는 것을 의미하는 것도 아닐 걸로 보이며 여하튼 무언가 일어나고 있다는 생각이 들며 위에 언급했는 인자들이 감소하는 걸로봐서 다른 기작이 작동할 수 있다는 생각이 듭니다.실험 디자인에 대한 자세한 내용이 있으시면 조언에 더 도움이 되실 것으로 보입니다.
그냥 참고하시면 되실 것입니다. -
답변
윤창호님의 답변
2016-10-05- 2
실험 디자인과 관련한 정보가 없어 정확히 말씀드리기는 힘들지만
단순히 COX-2 발현은 감소하지 않았지만 cox-2 효소의 converting product인 프로스타 글란딘 및 효소 활성이 감소한것으로 보아
1. 실험에 사용하신 항염증을 나타내는 material (?)이 COX-2 발현을 감소시키는 (expression level) 것이 아닌 효소활성을 억제하는 inhibitor라고 생각듭니다.
2. 혹은, 위에 말씀하신 염증 마커들을 직접적으로 억제할 수 있는 능력을 가질 수 도 있다고 생각합니다.
따라서, 다양한 염증기작에서 이러한 마커들을 이용하여 전사단계의 억제인지 혹은 단백질 결합을 통한 길항제로써의 역할인지 등에 대해 많은 연구가 필요하다고 생각됩니다.
김재용(jykim761217) 2016-10-10답변 감사합니다. 혹시 단백질 수준에서는 COX-2 발현에 영향을 미치지 않으나 효소활성을 억제 하는 inhibitor 관련 논문 좀 추천부탁드립니다. 제가 이쪽으로 논문을 찾아봤지만 찾지 못했습니다. 부탁드립니다.
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답변
윤창호님의 답변
2016-10-11- 2
정확한 답이 될진 모르겠지만 관련한 논문 첨부드립니다.
실제로 아스피린 (COX-2 selective inhibitor는 아니지만)등은 COX-2 효소의 활성화 부위에 결합하여 프로스타글란딘의 변환을 막는 것으로 알고 있습니다. COX-2의 경우 프로스타글란딘의 전환효소이기는 하지만 실제로 염증에 영향을 주기 위해서는 프로스타글란딘E2 D2 등의 전환효소가 따로 있는 것으로 알고 있습니다. 이러한 마지막 단계의 효소들도 check해 보시는 것이 좋을 것 같습니다. cox-2의 경우 inducible form과 constitutive form이 있기에 사용하시는 세포 및 조직 등 모델도 확인해 보시면 도움이 될꺼 같습니다.
첨부드린 논문은
아스피린 및 아스크로빈산이 IL-1B에 의해 유도되는 PGE2 생산을 억제하지만 COX-2 단백질양에는 큰 차이가 없다는 것을 보여주는 논문입니다 ( fig1 and fig4).
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답변
이광호님의 답변
2016-10-19- 1
정확한 답이 될지는 모르겠지만,
위에 답변 해주신 분들과 비슷하게 COX-2가 나머지 인자들에 관여하게 되어 있지만 COX-2 만이 관여하는 것은 아닌 걸로 알고 있습니다.
다양한 경로를 통해서 염증 인자들이 조절 되는데
항염증 실험중에 사용된 샘플이 cox-2도 조절을 하지만 다른 부분을 건드려서 작용할 수 도 있기때문에 더 광범위하게 공부를 하여 다른 인자들도 확인해보는게
도움이 될 것 같습니다.
다양한 인자들을 확인하여 실마리를 찾은 후에 다시 스토리를 만드시는게 좋을 듯 합니다.
또한 cox-2관련 된 것들의 조절이 큰 변화를 보이지 않는다면 감소되거나 그런것이 아니라
변화가 없는것은 아닌지 의심이 됩니다.
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답변
임창임님의 답변
2017-03-16- 1
앞서 말씀하신 분처럼 염증 관련 물질을 COX2만 만드는 것은 아닌 것으로 알고 있습니다.
또한 COX2의 발현이 아니라 활성(activity)에 영향을 줄 수도 있지 않을까 생각합니다.
RNA, 단백질 수준을 보는 것 외에도 COX2 activity assay를 해 보심은 어떨까요?
관련 자료 첨부합니다.
도움이 되길 바랍니다.