2016-09-30
org.kosen.entty.User@3214ee44
성은수(hugomale)
- 3
brain에서 특정 부분을 적출해서 신경줄기세포를 culture 하고 있습니다.
primary culture를 할때 culture dish에 PLO (Poly -L-Ornithine )+ FN(fibronectin) coating을 한후 세포를 키우고 있는데요. 미리 PLO/FN을 코팅한 후 -20도나 -80도에 보관해서 사용할 수 있는지 궁금합니다. 그래고 만약 보관이 가능하다면 FN coating후 PBS로 washing을 다 한 후 suction을 해서 다 비운상태로 보관을 하면 되는것인가요?
primary culture를 할때 culture dish에 PLO (Poly -L-Ornithine )+ FN(fibronectin) coating을 한후 세포를 키우고 있는데요. 미리 PLO/FN을 코팅한 후 -20도나 -80도에 보관해서 사용할 수 있는지 궁금합니다. 그래고 만약 보관이 가능하다면 FN coating후 PBS로 washing을 다 한 후 suction을 해서 다 비운상태로 보관을 하면 되는것인가요?
- Neural stem cell
- PLO/FN coating
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2016-09-30- 1
제 경험으론 Poly-L-Lysine (PLL)의 경우에는 coating이 끝난 culture dish를 실온에 보관했던 기억이 있습니다만, 님께서 질의하신 내용엔 fibronectin 등도 포함이 되어 있으므로 suction 후 건조시킨 후 냉장 또는 냉동 보관하시는 편이 좋을 듯 싶네요. 하지만 냉동 시의 단점도 존재를 하므로 충분히 고려하셔야 합니다.
사실 coating material이 얼마나 안정한지 확인하셔서 조건을 정하시는 편이 좋습니다. 모든 실험이 그렇듯이 실험자가 직접 해보고 만들어가야 하는 것이 실험방법이니까요... -
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윤창호님의 답변
2016-10-06- 1
윗분 말씀되로 PLL 계열 들은 코팅 후 clean bench상에서 보관을 많이 하고 사용하고 있는 것으로 알고 있습니다.
하지만 fibronectin등은 온도에 민감하여 코팅 후 보관을 오래하지 않는 것으로 알고 있습니다. 실제로 코팅후 4C에서 sealing한 상태에서 2-4주 보관이 가능한걸로 sigma 홈페이지에서 찾을 수 있습니다.
http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/biofiles/product-protocols.html
참고하시면 도움이 될꺼 같네요 -
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오요한님의 답변
2016-11-01- 1
저 역시 neural stem cell culture를 위해 PLO/FN/L(Laminin) coating 을 자주 합니다.
실험 직전에 coated dish가 없다던가 준비를 위해 급하게 coating할 때 정말 귀찮고 짜증이 나지요...
하지만 제 경험상은 coating후 말려서 냉장/냉동 보관을 한다거나 용액에 잠근채 장시간 incubator나 bench에
보관해 둘 경우 세포의 adhesion이 심각하게 저해됨을 확인했습니다.
물론 세포나 실험조건에 따라 달라질 수는 있겠으나 PLL이나 PDL계열 coating과는 전혀 다른 양상이 관찰되네요.
PLO(저희는 PO라고 부릅니다만)/FN coating만 하고는 test해 보지 않았습니다만 PLO/FN/L의 결과와 동일하지 않을까 생각됩니다.
감사합니다.