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지식나눔

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sodium pyrophosphate buffer (pH 8.8) 제조 방법

2016-11-04 org.kosen.entty.User@326405af 임태중(willow1015)
  • 2

첨부파일

현재 박테리아의 ALDH activity 활성을 측정하기 위해 

준비 중입니다. 

buffer로 sodium pyrophosphate buffer (ph 8.8) 준비하고자 하는데 

sigma에서 sodium pyrophosphate 구입 후 어떤식으로 처리해야하는지 궁금하여 글 남깁니다.

참고하는 논문 첨부하니 답변 부탁드립니다. 
  • sodium pyrophosphate
  • ALDH assay
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답변 2
  • 답변

    오요한님의 답변

    2016-11-05
    • 2
    ALDH activity를 측정하기 위해 60 mM sodium pyrophosphate buffer (pH 8.8) 를 제작한다고 나와있는데요,
    60 mM sodium pyrophosphate buffer containing 1 mM NAD+ and 0.1 mM 4-methylpyrazole 와
    60 mM sodium pyrophosphate buffer containing 1 mM NADP+ and 0.1 mM 4-methylpyrazole 를
    준비하시면 되겠습니다.
    여기서 4-methylpyrazole은 ADH activity를 inhibit하기 위해 넣는 것이므로 용도에 맞게 넣으시길 바랍니다.

    그 중 sodium pyrophosphate buffer 만드는 방법을 자세히 설명 드리자면,
    (만약 Sigma-Aldrich에서 cat.No. 221368 (sodium pyrophosphate decahydrate) 를 구매하셔서 사용하신다면),
    2.676 g sodium pyrophosphate decahydrate를 100 mL ultrapure water에 녹이신 후,
    8% (v/v) phosphoric acid를 이용해 buffer의 pH를 8.8으로 맞추시면 됩니다.
    여기에다가 NAD+, NADP+, 4-methylpyrazole 따위의 stock을 final conc.에 맞게 희석하시면 되겠습니다. 

    도움 되셨기를 바랍니다.
    감사합니다.
    답변수정
    ALDH activity를 측정하기 위해 60 mM sodium pyrophosphate buffer (pH 8.8) 를 제작한다고 나와있는데요,
    60 mM sodium pyrophosphate buffer containing 1 mM NAD+ and 0.1 mM 4-methylpyrazole 와
    60 mM sodium pyrophosphate buffer containing 1 mM NADP+ and 0.1 mM 4-methylpyrazole 를
    준비하시면 되겠습니다.
    여기서 4-methylpyrazole은 ADH activity를 inhibit하기 위해 넣는 것이므로 용도에 맞게 넣으시길 바랍니다.

    그 중 sodium pyrophosphate buffer 만드는 방법을 자세히 설명 드리자면,
    (만약 Sigma-Aldrich에서 cat.No. 221368 (sodium pyrophosphate decahydrate) 를 구매하셔서 사용하신다면),
    2.676 g sodium pyrophosphate decahydrate를 100 mL ultrapure water에 녹이신 후,
    8% (v/v) phosphoric acid를 이용해 buffer의 pH를 8.8으로 맞추시면 됩니다.
    여기에다가 NAD+, NADP+, 4-methylpyrazole 따위의 stock을 final conc.에 맞게 희석하시면 되겠습니다. 

    도움 되셨기를 바랍니다.
    감사합니다.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    이상열님의 답변

    2016-11-05
    • 2
    윗분께서 답변을 상세히 잘 해주신 것으로 보입니다. 윗분 답변에 약간의 첨언을 드리자면, sodium pyrophosphate buffer를 만드실 때, 2.676 g sodium pyrophosphate decahydrate를 100 mL ultrapure water (증류수)에 녹이면 벌써 60 mM이 됩니다. 여기에 8% (v/v) phosphoric acid를 첨가하여 pH 8.8이 되고 NAD+ (혹은 NADP+)와 4-methylpyrazole를 각각 첨가하면 전체 volume이 100 ml 이상이 될 확률이 높아 정확하게 60 mM이 되지 않고 농도가 더 낮아질 가능성이 높습니다. 따라서, 녹일 때 증류수 70 혹은 80 ml에서 녹이는 것을 진행한 후 적정의 농도의 시약을 다 첨가한 후 100 ml를 만드시는 것이 좋을 것입니다. 

    이 방법이 아니면 high concentrated sodium pyrophosphate buffer (예를 들어 600 mM, pH 8.8)을 따로 만드시고, NAD+, NADP+, 4-methylpyrazole에 대한 stock solution (10X)도 따로 준비하셔서, 각각 10 ml씩을 증류수에 섞어서 증류수로 최종 100 ml를 만드시는 것도 하나의 방법이 되시겠습니다. 이것은 하나의 예이고 각 시약마다 조건이 이 있을 수 있으니 약간 수정해서 진행하시면 되시겠습니다.

    혹시 자세한 사항이 필요하시면 댓글 달아주시면 말씀드리도록 하겠습니다.
    건투를 빕니다.
     
    답변수정
    윗분께서 답변을 상세히 잘 해주신 것으로 보입니다. 윗분 답변에 약간의 첨언을 드리자면, sodium pyrophosphate buffer를 만드실 때, 2.676 g sodium pyrophosphate decahydrate를 100 mL ultrapure water (증류수)에 녹이면 벌써 60 mM이 됩니다. 여기에 8% (v/v) phosphoric acid를 첨가하여 pH 8.8이 되고 NAD+ (혹은 NADP+)와 4-methylpyrazole를 각각 첨가하면 전체 volume이 100 ml 이상이 될 확률이 높아 정확하게 60 mM이 되지 않고 농도가 더 낮아질 가능성이 높습니다. 따라서, 녹일 때 증류수 70 혹은 80 ml에서 녹이는 것을 진행한 후 적정의 농도의 시약을 다 첨가한 후 100 ml를 만드시는 것이 좋을 것입니다. 

    이 방법이 아니면 high concentrated sodium pyrophosphate buffer (예를 들어 600 mM, pH 8.8)을 따로 만드시고, NAD+, NADP+, 4-methylpyrazole에 대한 stock solution (10X)도 따로 준비하셔서, 각각 10 ml씩을 증류수에 섞어서 증류수로 최종 100 ml를 만드시는 것도 하나의 방법이 되시겠습니다. 이것은 하나의 예이고 각 시약마다 조건이 이 있을 수 있으니 약간 수정해서 진행하시면 되시겠습니다.

    혹시 자세한 사항이 필요하시면 댓글 달아주시면 말씀드리도록 하겠습니다.
    건투를 빕니다.
     
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