2017-02-16
org.kosen.entty.User@3a029038
성경주(skj)
- 5
세포상태에서 염증반응 현상을 조사하고 있는데요
ELISA (The enzyme-linked immunosorbent assay) 실험기법으로 실험을 할 예정입니다.
cytokines의 OD값을 측정 할 때 필요한 standard 값를 구하고 결과 분석을 해야 하는데요.
standard 값을 구하는 방법에 대해 아시는분이 있으면 알려주셨으면 합니다.
cytokine 관련 ELISA KIT에는 standard가 포함이 되어있는걸 알지만 비용이 많이 드네요.
ELISA (The enzyme-linked immunosorbent assay) 실험기법으로 실험을 할 예정입니다.
cytokines의 OD값을 측정 할 때 필요한 standard 값를 구하고 결과 분석을 해야 하는데요.
standard 값을 구하는 방법에 대해 아시는분이 있으면 알려주셨으면 합니다.
cytokine 관련 ELISA KIT에는 standard가 포함이 되어있는걸 알지만 비용이 많이 드네요.
- ELISA
- CYTOKINES
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답변 5
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답변
김현홍님의 답변
2017-03-23- 2
제 생각에도 위에 분들께서 답해주신 대로 KIT를 구매하시는 것이 좋을듯합니다
또한 KIT에 따라 ELISA 방식(direct, indirect, sandwich 등)에 따라 STD curve 또한
다양한 방식으로 작성될 수 있으므로 STD만 따로 사서 작성하는건 무리가 있을듯 합니다.
그리고 측정하고자 하시는 Cytokines은 어떤 방식(원리, 시약)으로 하실려는 건지...
시간적으로나 자금적으로나 시약업체에서 제조되어 나오는 것으로 측정하시는 것이
훨씬 낫습니다.
www.biocompare.com에 들어가셔서 내가 사용하고자 하는 물질에 대한 측정KIT가 어느정도인지 저는 일단 확인스크린하고 여러 업체들을 뒤져봅니다.. -
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임창임님의 답변
2017-02-16- 1
저는 키트에 나온 것만 이용했지만, 키트가 비싸죠.
제 생각으로 BSA (알부민)을 이용하여 스탠다드 커브를 그려 단백질을 정량하는 것처럼
보시고자 하는 사이토카인을 따로 구입해서 농도별로 설정하신 후 진행하면 어떨까요?
그리고 R&D system 사 (국내 공급사는 고* 등) 주로 ELISA를 취급하니
관계자 분께 문의하면 더 빠르지 않을까 생각합니다.
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답변
이상후님의 답변
2017-02-16- 1
kit에 포함된 standards와 그에 따른 버퍼 등은 제조사에서 최적화하여 만든 조건이기 때문에
거의 대부분 연구자들이 kit을 사용하고 제조사의 instruction에 따라 측정하고 있습니다.
standard curve는 kit에 따라서 제조시에 다양한 패턴으로 만들어 질 수 있습니다. 예를 들어, linear curve, sigmoidal curve, reverse sigmoidal curve 등 ELISA 방식(direct, indirect, sandwich 등)에 따라 다양한 커브를 얻을 수 있는데, 이것을 in house 방식으로 측정하게 되면 good correlation coefficient 값을 얻기가 힘들 수 있습니다. 아울러 standard만을 따로 구입해서 calibration curve를 작성할 경우, 내부 정도관리(일내, 일간 정확도 및 정밀성, 민감도, 특이도 등)를 해서 acceptable criteria내에 있어야 사용할 수 있습니다. 비용이 좀 들더라도 kit 구매하여 사용하시길 권장합니다. -
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이상열님의 답변
2017-02-18- 1
윗분 말씀처럼 Kit을 사용하시는 것이 추후 결과의 정확성에 도움이 됩니다. Standard Curve값은 보통 Kit에 자세히 설명이 되어 있습니다. 또한 여러 프로그램으로 준비할 수도 있습니다. -
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권정희님의 답변
2017-02-28- 1
위에 전문가분들께서 좋은 답을 해 주신거 같은데, 제 경험중에 일부를 말씀드리고 싶습니다.
저도 질문자분과 같은 생각으로 표준 사이토카인 물질을 구매해서 원래 킷트가 제공하는 standard의 표준곡선처럼 해 보려는 시도를 해 봤으나 우리가 보통 생각하는 표준곡선(흔히, UV-vis spectrophotometer나 Fluorescence spectrophotometer에서 표준물질 농도별 표준곡선 만드는 방식하고는 모드가 다릅니다. ELISA는 항원항체반응을 이용하기 때문에 아마 일차직선의 방식으로는 거의 표준곡선이 만들어 지지 않습니다. 그래서 제조자가 어느 정도의 validation을 테스트한 상업화된 키트를 사용하는 이유인거 같습니다.