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지식나눔

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collagenase 분해실험 질문입니다

2017-06-09 org.kosen.entty.User@fa0a91b 신용원(begopa1)
  • 3
콜라겐 유래 물질을 가교하여 제작한 지지체를 collagenase 를 이용하여 분해실험을 하려고 하는데요...
논문에는 2ml containing 200ug collagenase type I at 4도, 12시간
add 200ul 0.2M EDTA, cooling ice bath immediately
supernatant of mixture was hydrolyzed in 6M HCl at 110도, 24시간 UV spectroscopy absorbance of hydroxyproline

이렇게만 나오는데... 셈플의 양은 어느정도 넣어야 할것이며...6M HCl 은 얼마나 넣어야 하는지는 어떻게 알 수 있을까요? 혹시 비슷한 실험 해보신 선배님들의 고견 부탁드립니다
  • collagenase
  • hydroxyproline
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답변 3
  • 답변

    김병관님의 답변

    2017-06-09
    • 2
    commercial 약산성 콜라겐 용액입니다.
    Bovine Collagen Solution
    Type I, Acid soluble telocollagen, 6 mg/mL, sterile filtered, BSE-Free, suitable for biomedical research
    (Bovine corium, acid solubilized collagen, telocollagen, pH 2 in 0.01 N HCl. Predominantly Type I collagen with approximately 5% Type III, at 6 mg/ml.)
    비슷한 조건이면 녹을 듯 합니다.

    다른 논문도 검색해서 비교해보시는게 좋을 것 같습니다.
    답변수정
    commercial 약산성 콜라겐 용액입니다.
    Bovine Collagen Solution
    Type I, Acid soluble telocollagen, 6 mg/mL, sterile filtered, BSE-Free, suitable for biomedical research
    (Bovine corium, acid solubilized collagen, telocollagen, pH 2 in 0.01 N HCl. Predominantly Type I collagen with approximately 5% Type III, at 6 mg/ml.)
    비슷한 조건이면 녹을 듯 합니다.

    다른 논문도 검색해서 비교해보시는게 좋을 것 같습니다.
    신용원(begopa1) 2017-06-09

    비슷한 조건이란게 어떤건지 잘 이해가 되지 않습니다 ㅠ

  • 답변

    장성재님의 답변

    2017-06-12
    • 2
    참고하신 논문의 내용인데,

    - 논문에는 2ml containing 200ug collagenase type I at 4도, 12시간
    효소의 의 반응 조건인데, 보통 효소는 역가로 표시하는 것이 일반적입니다.

    - add 200ul 0.2M EDTA, cooling ice bath immediately
    효소의 기질 분해 반응을 종결(termination)시키는 조건입니다.

    - supernatant of mixture was hydrolyzed in 6M HCl at 110도, 24시간 UV spectroscopy absorbance of hydroxyproline
    참고문헌의 경우 콜라겐이 기질이므로 분해산물인 hydroxyproline을 UV spectrophotometer로 측정한 것으로 보입니다.


    위와 유사한 참고문헌은 pubmed 또는 googling을 통하여 얼마든지 구하실 수 있을 겁니다. 
    아니면 질문자께서 직접 몇몇 조건을 검토하시고 실험에 임하셔야 할 듯 합니다.

    http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0056330
    위 참고문헌에서는 효소 반응 후 남은 scaffold를 동결건조 후 칭량(저울로 정량)하는 방법을 썼습니다.
    답변수정
    참고하신 논문의 내용인데,

    - 논문에는 2ml containing 200ug collagenase type I at 4도, 12시간
    효소의 의 반응 조건인데, 보통 효소는 역가로 표시하는 것이 일반적입니다.

    - add 200ul 0.2M EDTA, cooling ice bath immediately
    효소의 기질 분해 반응을 종결(termination)시키는 조건입니다.

    - supernatant of mixture was hydrolyzed in 6M HCl at 110도, 24시간 UV spectroscopy absorbance of hydroxyproline
    참고문헌의 경우 콜라겐이 기질이므로 분해산물인 hydroxyproline을 UV spectrophotometer로 측정한 것으로 보입니다.


    위와 유사한 참고문헌은 pubmed 또는 googling을 통하여 얼마든지 구하실 수 있을 겁니다. 
    아니면 질문자께서 직접 몇몇 조건을 검토하시고 실험에 임하셔야 할 듯 합니다.

    http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0056330
    위 참고문헌에서는 효소 반응 후 남은 scaffold를 동결건조 후 칭량(저울로 정량)하는 방법을 썼습니다.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    박진성님의 답변

    2017-06-13
    • 2
    1. collagenase: 사용하는 제품의 data sheet를 보시면 사용량이 써있을 겁니다. 설명서를 읽어보세요. 참고로, stem cell technology사의 collagenase I (0.25%)는 For a 1 - 1.5 mL collagen thin gel, add 1 mL of Collagenase Type I (0.25%). 라고 되어있습니다.

    2. 6M HCl 계산: 아래 읽어보시고 계산하세요. 
    Assume that you want to prepare 1 L of 1 mol/L HCl.

    Step 1. Calculate the moles of HCl needed.

    Moles of HCl=1L HCl×1 mol HCl1L HCl=1 mol HCl

    Step 2. Calculate the mass of HCl Needed.

    Mass of HCl=1mol HCl×36.46 g HCl1mol HCl=36.46 g HCl

    Step 3. Calculate the mass of solution required.

    Mass of soln=36.46g HCl×100 g soln35g HCl=104.2 g soln

    Step 4. Calculate the volume of solution required.

    Volume of soln=104.2g soln×1 mL soln1.18g soln=88 mL soln
     

    3. 너무 기본적인 개념에 대해 찾아보지도 않고 물어보지 말고, 공부를 하시기를 조언드립니다.
    답변수정
    1. collagenase: 사용하는 제품의 data sheet를 보시면 사용량이 써있을 겁니다. 설명서를 읽어보세요. 참고로, stem cell technology사의 collagenase I (0.25%)는 For a 1 - 1.5 mL collagen thin gel, add 1 mL of Collagenase Type I (0.25%). 라고 되어있습니다.

    2. 6M HCl 계산: 아래 읽어보시고 계산하세요. 
    Assume that you want to prepare 1 L of 1 mol/L HCl.

    Step 1. Calculate the moles of HCl needed.

    Moles of HCl=1L HCl×1 mol HCl1L HCl=1 mol HCl

    Step 2. Calculate the mass of HCl Needed.

    Mass of HCl=1mol HCl×36.46 g HCl1mol HCl=36.46 g HCl

    Step 3. Calculate the mass of solution required.

    Mass of soln=36.46g HCl×100 g soln35g HCl=104.2 g soln

    Step 4. Calculate the volume of solution required.

    Volume of soln=104.2g soln×1 mL soln1.18g soln=88 mL soln
     

    3. 너무 기본적인 개념에 대해 찾아보지도 않고 물어보지 말고, 공부를 하시기를 조언드립니다.
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