2017-09-16
org.kosen.entty.User@1e17e5a6
장미옥(bestwife76)
- 4
식물세포배양에서 배지 pH조절이나 2가 양이온 첨가를 통해 이차대사산물 생산량 증대를 꾀하고자 합니다
물질생산배지의 pH는 6대이고요
여기에 초기 pH를 7이후로 높여보고 싶습니다
물론 세포의 항상성 유지를 위해 떨어뜨리겠지만 그 과정 중 스트레스를 받을거고 그에 의해 2차대사산물 생산하라고요
또한 2가 양이온 마그네슘과 망간이 효소가 작용하여 다음 물질을 만들려면필요하다고 하고요
식물에 따라 물질에 따라 마그네슘 또는 망간 각각이 최적일수 있답니다
농도는 10mM 이 최적이라 합니다 문헌에서요
물론 in vitro 실험이긴 하죠
제 배지에는
마그네슘이 MgSO4형태로 1.5mM
망간은 MnSO4형태로 100uM 들어있습니다
저는 MgCl2 MnCl2 형태로 10mM씩 첨가하려고 했는데
pH를 6대로 맞추려니 배지에서 가루가 심각히 발견됩니다특히 망간들어간 배지에서요
실험을 어떻게 진행하는게 좋을까요
1. 결정이 안생기는 pH로 낮춘다
5.8 정도일수도 있고 반응하기에 최적 pH가 아닐수 있습니다
2. 망간 농도 낮추기
100배나 높게 올리지 않고
마그네슘과 유사한 배수 만큼 올린다
즉 약 8배. 추가하여 800uM 정도로 첨가
그러면 결정이 안생길수도 있을까
효소가 제대로 일해서 타겟물질을 잘 생산할까
3. 마그네슘이나 망간을 넣으면
pH가 4대이고 6대까지 올리기 위해
다량의 NaOH 첨가
pH조정을 위해
Tris or phosphate buffer 사용가능할까?
이차대사산물에 영향없을까
위 세 가지 중 좋은 선택이 있을까요?
아니면 더 좋은 선택은 무엇일까요?
물질생산배지의 pH는 6대이고요
여기에 초기 pH를 7이후로 높여보고 싶습니다
물론 세포의 항상성 유지를 위해 떨어뜨리겠지만 그 과정 중 스트레스를 받을거고 그에 의해 2차대사산물 생산하라고요
또한 2가 양이온 마그네슘과 망간이 효소가 작용하여 다음 물질을 만들려면필요하다고 하고요
식물에 따라 물질에 따라 마그네슘 또는 망간 각각이 최적일수 있답니다
농도는 10mM 이 최적이라 합니다 문헌에서요
물론 in vitro 실험이긴 하죠
제 배지에는
마그네슘이 MgSO4형태로 1.5mM
망간은 MnSO4형태로 100uM 들어있습니다
저는 MgCl2 MnCl2 형태로 10mM씩 첨가하려고 했는데
pH를 6대로 맞추려니 배지에서 가루가 심각히 발견됩니다특히 망간들어간 배지에서요
실험을 어떻게 진행하는게 좋을까요
1. 결정이 안생기는 pH로 낮춘다
5.8 정도일수도 있고 반응하기에 최적 pH가 아닐수 있습니다
2. 망간 농도 낮추기
100배나 높게 올리지 않고
마그네슘과 유사한 배수 만큼 올린다
즉 약 8배. 추가하여 800uM 정도로 첨가
그러면 결정이 안생길수도 있을까
효소가 제대로 일해서 타겟물질을 잘 생산할까
3. 마그네슘이나 망간을 넣으면
pH가 4대이고 6대까지 올리기 위해
다량의 NaOH 첨가
pH조정을 위해
Tris or phosphate buffer 사용가능할까?
이차대사산물에 영향없을까
위 세 가지 중 좋은 선택이 있을까요?
아니면 더 좋은 선택은 무엇일까요?
- 효소 활성화 이차대사산물
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
장성재님의 답변
2017-09-18- 1
님께서 언급하신 3가지 조건을 직접 해보셔야 할 것 같네요.
어떤 세포를 사용하시는지 어떤 대사산물을 생산하시는지 모르는 상태에서 어떤 조언도 해드릴 수가 없습니다.ㅠㅠ -
답변
김동현님의 답변
2017-09-19- 1
생각보다 어려운 실험이 될 수도 있겠네요. 제가 여러 종류 세포의 대사물질을 분석하는 일을 오랫동안 해오고 있는데 아시다 시피 식물세포이던, 미생물이던, 포유류 세포이던 대사물질은 약간의 환경 변화에도 엄청난 변화를 겪기 때문에 원하시는 결과를 만들어내시는데 꽤 오랜시간이 걸릴 수도 있습니다. 제가 너무 부정적인 말만 늘어놓았는데요. 앞서 말씀해주신 것처럼 우선 여러가지 조건을 잘 계획하셔서 한번 실허을 해보시는 것이 가장 좋을 것 같습니다. -
답변
장미옥님의 답변
2017-09-22- 1
답변 감사드립니다
어떻게든 실험양을 줄여보고자 이래저래 고민해 보고 검색해보고 의견도 물어보고 했는데요
결국은 여러 차례 실험을 통해 직접 부딪쳐야 할 것 같습니다
다만, 답변에 따라
제 생각이 정리되어
보다 명확하게 실험을 진행할 수 있게 되었습니다
-
답변
이상후님의 답변
2017-10-03- 1
Phosphate 버퍼나 tris 버퍼같은 버퍼 존이 상대적으로 넓은 버퍼를 사용해 보시길 바랍니다. 망간염의 경우는 pH 6에서 일정농도 이상이 되면 용해도가 떨어져 염의 형태로 침전이 생기게 되므로, 특히 10 mM 농도의 MgCl2나 MnCl2는 식물세포 입장에서는 상당히 높은 농도의 메탈 농도가 될수 있습니다. 침전이 문제가 된다면 처음부터 10 mM 농도로 하지말고 침전이 생기기 않을 더 낮은 농도로 첨가하면서 서서히 농도를 높여가보는게 어떨까요.
네
답변 감사드립니다
구체적인 연구내용에 대해 언급할수 없는 건이라 이렇게 밖에는 기재하지 못했습니다
죄송하고요
그래도 어쨌든 해보는 수밖에 없다는 1표를 얻어 힘을 얻습니다
실험해보겠습니다