2017-09-18
org.kosen.entty.User@79fb8530
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안녕하세요
PRNT 실험을 하다가 실험결과 해독중 문제점이생겨서 글을 올립니다.
PRNT Negative control로 2%MEM + virus 그룹과 Normal serum 1/10 (2%MEM으로 희석)+virus 그룹을 넣었습니다. 이론상으로는 두 그룹간 plaque 갯수가 다르지않아야한다고 생각하는데 normal serum 그룹이 눈에띄게 적은 plaque가 보입니다. 이유를 잘모르겠습니다.
그래서 결과를 해석하기에어려움이있습니다.
그 test그룹은 2%MEM + virus 그룹을 control로 할땐 reduction효과가있다고 보여지고
Normal serum 1/10 (2%MEM으로 희석)+virus 그룹을 control로 봤을때 reduction 효과가 없다고 보여집니다.ㅠㅠ
혹시 참고할만한 논문이나 문제해결에 대한 방안을 아신다면 답변 기다리겠습니다.
*Normal serum은 그냥 보통 쥐에서 심장채혈한 serum 입니다. negative control로 사용하기 위함. 또한 normal serum 1/5,1/10,1/50으로 추가실험을 했을때 희석배율에따른 plaque 변화는없었으며 2%MEM + virus 그룹에 비해 적은 plaque를 형성하고 있었습니다.
PRNT 실험을 하다가 실험결과 해독중 문제점이생겨서 글을 올립니다.
PRNT Negative control로 2%MEM + virus 그룹과 Normal serum 1/10 (2%MEM으로 희석)+virus 그룹을 넣었습니다. 이론상으로는 두 그룹간 plaque 갯수가 다르지않아야한다고 생각하는데 normal serum 그룹이 눈에띄게 적은 plaque가 보입니다. 이유를 잘모르겠습니다.
그래서 결과를 해석하기에어려움이있습니다.
그 test그룹은 2%MEM + virus 그룹을 control로 할땐 reduction효과가있다고 보여지고
Normal serum 1/10 (2%MEM으로 희석)+virus 그룹을 control로 봤을때 reduction 효과가 없다고 보여집니다.ㅠㅠ
혹시 참고할만한 논문이나 문제해결에 대한 방안을 아신다면 답변 기다리겠습니다.
*Normal serum은 그냥 보통 쥐에서 심장채혈한 serum 입니다. negative control로 사용하기 위함. 또한 normal serum 1/5,1/10,1/50으로 추가실험을 했을때 희석배율에따른 plaque 변화는없었으며 2%MEM + virus 그룹에 비해 적은 plaque를 형성하고 있었습니다.
- PRNT
- plaque
- virus
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
장성재님의 답변
2017-09-18- 1
어떤 바이러스를 사용한 PRNT 실험인가요?
Negative control에 사용하신 normal serum은 대상 바이러스에 노출된 적이 없는 개체의 것을 사용하셨나요? 그냥 보통 쥐의 것을 사용했다고 하셨는데 항원에 대한 노출 여부가 확인된 것 인가요? -
답변
장성재님의 답변
2017-09-19- 1
normal mouse serum을 negative control로 사용하시는 이유가 뭔가요?
마우스에서 분리한 zika virus 또는 viral antigen에 대한 항체(혈청)의 중화역가 테스트를 하기 위함입니까?
실험이 목적이 위의 내용이라면 serum-free가 아닌 실험군과 동일한 양의 mouse serum이 들어간 것이 negative control이 되겠지요.
virus free mouse plasma를 구입해서 실험에 사용하신 normal mouse serum과 비교 실험을 해보시는 것은 어떨까요?
일반적인 마우스 사육방식으로는 virus free 마우스 혈청을 얻기 어려울 것 같네요.
ZIKA virus를 사용한 PRNT 실험입니다. 네, 보통 쥐는 항원 노출이 된적없는 쥐입니다. 또는 serum 준비하는 과정에서 주의 할점 이 따로 있는지도 궁금합니다.(어느 부분에서 잘못되었는지, 의문입니다ㅠㅠ)심장채혈해서 centrifuge후, 상층액만 사용하고 inactivation 56도 30min진행후, virus와 mix후 incubation 시간을 가진 뒤 infection을 하고있습니다
그리고 base media로는 2%FBS가 들어있는 MEM을 사용중이며, No FBS로도 test한결과 2%MEM과는 같은 plaque가 형성되었습니다.